膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)負(fù)載兔脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞構(gòu)建組織工程膀胱的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分：種子細(xì)胞—兔脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定
　　 [目的]本部分從新西蘭兔腹股溝脂肪組織中分離得到脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(ADSCs)，并對(duì)其進(jìn)行體外培養(yǎng)、擴(kuò)增及鑒定，探討用ADSCs構(gòu)建組織工程膀胱的可行性。同時(shí)也探討了脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分化成尿路上皮細(xì)胞的可行性。
　　 [方法]用膠原酶消化法從兔的腹股溝脂肪中分離得到脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞，觀察其生物學(xué)行為，成脂、成骨誘導(dǎo)后，用油紅O及von Kossa、茜素紅染色定性等

2、手段進(jìn)行鑒定。用脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞與尿路上皮直接共培養(yǎng)的方法誘導(dǎo)脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞分化成尿路上皮細(xì)胞。
　　 [結(jié)果]用膠原酶消化法能分離得到脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞，光鏡檢查符合脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)，生長(zhǎng)曲線測(cè)定提示細(xì)胞生長(zhǎng)狀況良好、具有較強(qiáng)增殖能力。油紅O及von Kossa、茜素紅染色均陽性。脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)后有尿路上皮樣細(xì)胞特異性標(biāo)記。
　　 [結(jié)論]用膠原酶消化法從兔的腹股溝脂肪中分離得到的種子細(xì)胞，經(jīng)鑒定證實(shí)為脂肪

3、間充質(zhì)干細(xì)胞。該細(xì)胞來源廣泛、取材容易，創(chuàng)傷小，獲取的細(xì)胞數(shù)量多，培養(yǎng)條件要求低，擴(kuò)增能力強(qiáng)，是比較理想的組織工程種子細(xì)胞。同時(shí)也證明脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞有分化成尿路上皮細(xì)胞的潛能。
　　 第二部分：豬膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)支架材料的制備
　　 [目的]探討豬膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)(BAMG)制備的方法及其作為生物支架材料應(yīng)用于組織工程膀胱構(gòu)建的可行性。
　　 [方法]綜合了攪拌、反復(fù)凍融、滲透溶液、生物酶消化等方法，制備脫細(xì)胞的膀

4、胱粘膜下基質(zhì)。用HE染色檢查有無細(xì)胞成分殘留。
　　 [結(jié)果]經(jīng)脫細(xì)胞處理所得膀胱粘膜下基質(zhì)呈白色半透明狀，表面光滑，厚度約0.2cm，具有一定彈性及韌性。光鏡觀查無細(xì)胞成分殘留。
　　 [結(jié)論]綜合采用物理和化學(xué)方法，制備的膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)，組織相容性好，符合組織工程膀胱支架材料的要求。表明脫細(xì)胞膀胱粘膜下基質(zhì)是一種較為理想的膀胱組織修復(fù)替代材料。
　　 第三部分：組織工程膀胱的體外構(gòu)建及兔膀胱替代實(shí)驗(yàn)
　

5、　 [目的]通過采用脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞和豬膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)構(gòu)建組織工程膀胱的實(shí)驗(yàn)研究，探討應(yīng)用組織工程膀胱進(jìn)行膀胱替代修復(fù)的可行性。
　　 [方法]以新西蘭兔自體ADSCs為種子細(xì)胞，以豬的BAMG為支架材料，將ADSCs靜態(tài)接種于BAMG表面，體外構(gòu)建組織工程膀胱。新西蘭兔27只等分三組，均行膀胱部分切除術(shù)，A組用BAMG進(jìn)行替代修補(bǔ)，B組用復(fù)合ADSCs種子細(xì)胞的BAMG進(jìn)行替代修補(bǔ)，C組不作任何修補(bǔ)直接縫合，4、8、12周后

6、取材觀察組織工程膀胱的再生情況。
　　 [結(jié)果]術(shù)后A組修補(bǔ)區(qū)明顯攣縮，B組修補(bǔ)區(qū)無明顯攣縮。A組膀胱內(nèi)均有結(jié)石形成，B組及C組膀胱內(nèi)無結(jié)石形成。A、B兩組膀胱體積隨時(shí)間推移逐漸增加，至12周達(dá)40 ml左右，約為正常膀胱的80％左右，C組膀胱容量明顯縮小。修補(bǔ)區(qū)病理組織學(xué)檢查：4周時(shí)A組支架材料部分降解，修補(bǔ)區(qū)有大量彌漫炎細(xì)胞浸潤(rùn)，主要是淋巴細(xì)胞。粘膜面未見移行上皮生長(zhǎng)，粘膜下層有少量肌纖維形成；B組支架材料大部分降解，粘膜面

7、可見多層移行上皮生長(zhǎng)，粘膜下層可見大量肌纖維形成及新生的毛細(xì)血管長(zhǎng)入。8周時(shí)A組支架材料大部分降解，浸潤(rùn)的炎細(xì)胞明顯減少。粘膜面可見1到2層移行上皮生長(zhǎng)，粘膜下層可見大量膠原及少量肌纖維；B組支架材料基本降解，粘膜面可見多層移行上皮生長(zhǎng)，粘膜下層可見大量肌纖維及少量肌束形成，新生的毛細(xì)血管數(shù)量增多，管腔增大。12周時(shí)A組B組支架材料完全降解吸收，A組修補(bǔ)區(qū)粘膜面可見1到2層移行上皮生長(zhǎng)，粘膜下層可見大量的膠原和肌纖維；B組修補(bǔ)區(qū)粘膜面可