FoxM1基因在人類Burkitt淋巴瘤細(xì)胞株Raji中的功能研究.pdf

1、本文主要從以下幾方面進(jìn)行論述：
　　第一部分 FoxM1基因?qū)aji細(xì)胞株增殖和凋亡的作用
　　目的:FoxM1屬于Forkhead Box轉(zhuǎn)錄因子家族，參與調(diào)節(jié)正常細(xì)胞增殖和凋亡等多種重要病理生理過程，其在多種實(shí)體腫瘤存在異常高表達(dá)。近年來FoxM1在血液系統(tǒng)腫瘤中的作用被日漸關(guān)注，本文旨在研究FoxM1基因在人類Burkitt淋巴瘤細(xì)胞株Raji中的表達(dá)水平，探索其在B細(xì)胞淋巴瘤(B-NHL)疾病增殖和凋亡中的作用。<

2、br>　　方法:采用實(shí)時(shí)定量PCR(qRT-PCR)方法檢測正常人外周血CD19+的B淋巴細(xì)胞（正常對照，NC）和Raji細(xì)胞的mRNA水平，蛋白質(zhì)印記法(Western-blot)檢測蛋白水平的表達(dá)。硫鏈絲菌素(TST)是FoxM1的特異性抑制劑，是一種具有抗生素性質(zhì)的天然產(chǎn)物，用TST處理Raji細(xì)胞后，通過細(xì)胞增殖-毒性檢測試劑盒(CCK-8)進(jìn)行加入不同藥物濃度TST后的細(xì)胞活性抑制率檢測，24及36 h后加入CCK820μl，

3、測得各孔OD值，計(jì)算出TST對Raji細(xì)胞24 h及36 h的半抑制濃度(IC50);再用此濃度處理Raji細(xì)胞后，采用流式細(xì)胞術(shù)(FCM) Annexin/PI雙染法檢測用TST處理及未處理NC的凋亡率，同時(shí)在mRNA及蛋白水平驗(yàn)證FoxM1的表達(dá)變化。
　　結(jié)果:FoxM1在mRNA和蛋白水平的表達(dá)都顯著高于正常對照(p＜0.05和p＜0.001)，使用特異性抑制劑TST后明顯抑制Raji細(xì)胞增殖并且凋亡率顯著增加，進(jìn)一步分析

4、發(fā)現(xiàn)TST對Raji的作用呈劑量及時(shí)間依賴性，隨著劑量及時(shí)間的增加凋亡率呈現(xiàn)上升趨勢，測得24 h的半抑制濃度為5.39 mol/L,同時(shí)在mRNA及蛋白水平檢測FoxM1具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，即FoxM1顯著下調(diào)(p＜0.001和p＜0.05）。
　　結(jié)論:FoxM1在人類Burkitt淋巴瘤細(xì)胞株Raji中呈現(xiàn)mRNA和蛋白水平高表達(dá)，特異性抑制FoxM1表達(dá)可以抑制Raji增殖并促進(jìn)凋亡，表明FoxM1在Raji細(xì)胞增殖和凋亡中發(fā)

5、揮重要作用。
　　第二部分 FoxM1在Raji細(xì)胞株藥物增敏中的作用研究
　　目的:研究FoxM1特異性抑制劑thiostrepton(TST)在增加Raji細(xì)胞株對多柔比星藥物敏感性中的作用。
　　方法:利用CCK8和流式細(xì)胞術(shù)分別檢測TST和多柔比星對于Raji細(xì)胞株增殖和凋亡的影響，摸索兩種藥物作用的濃度梯度，進(jìn)一步利用兩者低濃度聯(lián)合處理Raji細(xì)胞株，觀察是否存在協(xié)同效應(yīng)。
　　結(jié)果:經(jīng)過分析發(fā)現(xiàn)TST

6、和多柔比星對于Raji細(xì)胞株增殖和凋亡的影響都呈現(xiàn)時(shí)間和劑量依賴性。TST對Raji細(xì)胞作用的IC50為5.39μmol/L，當(dāng)濃度為3μmol/L時(shí)細(xì)胞抑制率及凋亡率降低，Raji細(xì)胞平均凋亡率為10.82％;單用多柔比星0.08μmol/L和0.03μmol/L作用Raji細(xì)胞24 h后凋亡率分別為23.52％和9.32％，故認(rèn)為低濃度的TST(3μmoL/L)和多柔比星(0.03μmol/L)細(xì)胞毒性較弱;首先聯(lián)用3μmol/L的