白藜蘆醇對缺血再灌注大鼠腦損傷中的保護作用的研究.pdf

1、目的：
　　探討不同濃度白藜蘆醇對缺血再灌注腦損傷大鼠神經(jīng)功能損傷、TNF-α、HSP20表達的影響。
　　方法：
　　將150只健康的成年雄性SD大鼠采用隨機分組的方法分成5組，即：假手術(shù)組，模型組（I/R組），小劑量白藜蘆醇(10μmol/L)組、中劑量白藜蘆醇(50μmol/L)組、大劑量白藜蘆醇(100μmol/L)組，每組各30成年雄性SD大鼠，采用Longa線栓法并在此基礎(chǔ)上采用經(jīng)過經(jīng)改進制作腦缺血再灌注再

2、灌注大鼠模型制作大鼠大腦中動脈栓塞的模型，缺血2h后再灌注，灌注前20min給予生理鹽水或不同濃度白藜蘆醇腹腔注射，術(shù)后6h、24h、48h、72h、7d時間節(jié)點分別應(yīng)用經(jīng)典的Zea Longa法評定神經(jīng)功能缺損評分。應(yīng)用四氮唑紅染色(TTC)腦組織后計算腦梗死病灶體積并比較5組的差異；分別應(yīng)用免疫組化和免疫印跡檢測缺血腦組織周邊區(qū)組織的腫瘤壞死因子-α(TNF-α)與熱休克蛋白20(HSP20)表達量的差異并比較5組的差異。
　

3、　結(jié)果：
　　1、各組神經(jīng)功能缺損評分比較：假手術(shù)組大鼠均沒有明顯的神經(jīng)功能缺損癥狀。各模型組SD大鼠在缺血再灌注后各時間節(jié)點均有神經(jīng)功能缺損，且隨時間延長神經(jīng)功能缺損癥狀逐漸減輕。不同濃度白藜蘆醇干預(yù)組大鼠的神經(jīng)功能缺損均有顯著改善，隨著術(shù)后再灌注時間的延長，神經(jīng)功能缺損癥狀逐漸減輕；同時白藜蘆醇劑量越大，大鼠的神經(jīng)功能缺損改善更明顯，即大劑量白藜蘆醇組>中劑量白藜蘆醇組>小劑量白藜蘆醇組(P＜0.05)，呈顯著劑量依賴性。

4、r>　　2、各組腦梗死病灶體積比較：假手術(shù)組大鼠均沒有明顯腦梗死病灶。模型組大鼠大腦中動脈供血區(qū)可見大小不一蒼白色梗死腦組織，不同濃度白藜蘆醇干預(yù)各組大鼠的腦梗死體積顯著減少(P＜0.05)，且白藜蘆醇劑量越大，大鼠的腦梗死體積減少程度越大，即大劑量白藜蘆醇組>中劑量白藜蘆醇組>小劑量白藜蘆醇組(P＜0.05)，呈顯著劑量依賴性。
　　3、各組腦缺血周邊區(qū)組織免疫組化比較：在各個時間節(jié)點，各組大鼠缺血周邊區(qū)腦組織的TNF-α陽性細

5、胞數(shù)為：模型組>小劑量白藜蘆醇組>中劑量白藜蘆醇組>大劑量白藜蘆醇組>假手術(shù)組(P＜0.05)，并且白藜蘆醇劑量越大，大鼠的TNF-α陽性細胞數(shù)越小(P＜0.05)，呈顯著劑量依賴性。在各個時間節(jié)點，各組大鼠缺血周邊區(qū)腦組織的HSP20陽性細胞數(shù)為：大劑量白藜蘆醇組>中劑量白藜蘆醇組>小劑量白藜蘆醇組>模型組>假手術(shù)組(P＜0.05)，并且白藜蘆醇劑量越大，大鼠的HSP20陽性細胞數(shù)越多(P＜0.05)，呈顯著劑量依賴性。
　　4

6、、各組腦缺血周邊區(qū)Western blot檢測比較：在各個時間節(jié)點，各組大鼠缺血周邊區(qū)腦組織的TNF-α蛋白表達量為：模型組>大劑量白藜蘆醇組>中劑量白藜蘆醇組>小劑量白藜蘆醇組>假手術(shù)組(P＜0.05)，并且白藜蘆醇劑量越大，大鼠的TNF-α蛋白表達量越小(P＜0.05)，呈顯著劑量依賴性。在各個時間節(jié)點，各組大鼠缺血周邊區(qū)腦組織的HSP20蛋白表達量為：大劑量白藜蘆醇組>中劑量白藜蘆醇組>小劑量白藜蘆醇組>模型組>假手術(shù)組(P＜0.

7、05)，并且白藜蘆醇劑量越大，大鼠的HSP20蛋白表達量越多(P＜0.05)，呈顯著劑量依賴性。
　　結(jié)論：
　　1、缺血再灌注腦損傷過程中，白藜蘆醇能有效的保護大鼠腦神經(jīng)細胞，減少腦梗死體積，改善神經(jīng)功能缺損評分，這一作用可能是通過抑制 TNF-α表達，促進HSP20表達來完成的。
　　2、白藜蘆醇對腦缺血再灌注損傷的保護作用與劑量相關(guān)，并且呈現(xiàn)顯著劑量依賴性。
　　第二部分 JAK2/STAT3信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參

8、與白藜蘆醇抗腦缺血再灌注損傷作用的研究
　　目的：
　　探討JAK2/STAT3信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是否參與了白藜蘆醇抗腦缺血再灌注損傷的保護作用。
　　方法：
　　選擇180只健康成年雄性SD大鼠通過隨機數(shù)字表法隨機分為7組，分別為：假手術(shù)組、模型組、AG490處理組、小劑量白藜蘆醇(10μmol/L)組、中劑量白藜蘆醇(50μmol/L)組、大劑量白藜蘆醇(100μmol/L)組和聯(lián)合治療組，每組30只。應(yīng)用Long

9、a線栓法并加經(jīng)改進制作腦缺血再灌注再灌注大鼠模型制備大鼠大腦中動脈栓塞模型，缺血2h后再灌注，灌注前20min給予生理鹽水、AG490或白藜蘆醇腹腔注射后處死并取大鼠腦組織切片。應(yīng)用免疫組織化學(xué)檢測各組大鼠腦組織的p-STAT3及p-JAK2陽性細胞；應(yīng)用TUNEL法檢測各組大鼠腦組織的凋亡細胞數(shù)量；應(yīng)用Western blot檢測各組大鼠缺血再灌注腦組織的p-JAK2和p-STAT3蛋白表達情況。
　　結(jié)果：
　　1、各組

10、免疫組織化學(xué)比較：各組大鼠缺血周邊區(qū)腦組織的p-JAK2及p-STAT3陽性細胞數(shù)為：模型組>小劑量白藜蘆醇組>中劑量白藜蘆醇組>大劑量白藜蘆醇組>AG490處理組>聯(lián)合處理組P＜0.05)，并且白藜蘆醇劑量越大，大鼠的p-JAK2及p-STAT3陽性細胞數(shù)越小，呈顯著劑量依賴性.
　　2、各組凋亡細胞數(shù)量比較：各組大鼠缺血周邊區(qū)腦組織的凋亡細胞數(shù)量為：模型組>小劑量白藜蘆醇組>中劑量白藜蘆醇組>大劑量白藜蘆醇組> AG490處理

11、組>聯(lián)合處理組>假手術(shù)組(P＜0.05)，并且白藜蘆醇劑量越大，大鼠的凋亡細胞數(shù)量越小(P＜0.05)。
　　3、各組Western blot檢測比較：各組大鼠缺血周邊區(qū)腦組織的p-JAK2和p-STAT3的蛋白表達量，表達量為：模型組>小劑量白藜蘆醇組>中劑量白藜蘆醇組>大劑量白藜蘆醇組>AG490處理組>聯(lián)合處理組>假手術(shù)組(P＜0.05)，并且白藜蘆醇劑量越大，大鼠的p-JAK2、p-STAT3蛋白表達量越小(P＜0.05)