阿托伐他汀預(yù)處理對(duì)缺血再灌注心肌線粒體功能的保護(hù)機(jī)制研究.pdf

1、本文主要從以下幾方面進(jìn)行論述：
　　第1部分 缺血再灌注損傷動(dòng)物模型的建立及單次負(fù)荷劑量阿托伐他汀鈣預(yù)處理的保護(hù)作用
　　目的:
　　建立在體SD大鼠缺血再灌注模型，觀察阿托伐他汀預(yù)處理對(duì)再灌注心肌的保護(hù)作用，觀察氯尼達(dá)明對(duì)阿托伐他汀保護(hù)作用的影響。
　　方法:
　　1、缺血再灌注（Ischemia-reperfusion，I/R）動(dòng)物模型制作:選擇SD大鼠按照如下方法制作I/R模型:全麻下暴露心臟，離前降

2、支起點(diǎn)約2-3 mm處用5-0絲線結(jié)扎前降支，阻斷30分鐘后松開(kāi)再灌注120分鐘。
　　2、動(dòng)物分組:選擇SD大鼠20只，隨機(jī)分為4組，每組5只:(1)假手術(shù)組（sham組）:前降支只穿線，不結(jié)扎。(2)缺血再灌注損傷組（I/R組）:標(biāo)準(zhǔn)I/R動(dòng)物模型操作。(3)阿托伐他汀預(yù)處理組(Ator組):I/R操作前12h用阿托伐他汀80 mg/kg灌胃，然后進(jìn)行I/R操作。(4)阿托伐他汀預(yù)處理+氯尼達(dá)明組（Ator+LND組）:I/R

3、操作前12h用阿托伐他汀80 mg/kg灌胃，I/R操作前12h用阿托伐他汀80 mg/kg灌胃，然后進(jìn)行I/R操作，松開(kāi)結(jié)扎線前10分鐘經(jīng)腹腔注射氯尼達(dá)明(50mg/kg)。
　　3、觀察指標(biāo):記錄實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的體重和左室重量，全程記錄大鼠心率、心律變化。采用Evans Blue和TTC法檢測(cè)缺血再灌注心肌缺血危險(xiǎn)區(qū)和梗死區(qū)面積，用透射電鏡觀察再灌注心肌的超微結(jié)構(gòu)的變化。
　　4、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:將數(shù)據(jù)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)

4、行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料采用(x)±s表示，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，先用Levene法進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，若方差齊則采用LSD法行組間比較，若方差不齊采用Tamhane方法行組間比較。組間率的比較使用卡方檢驗(yàn)。假設(shè)P＜0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1、基線資料比較:各組SD大鼠的體重分別Sham組244.08±8.81 g、I/R組243.92±10.41 g、Ator組246.69±8.23g、Ator

5、+LND組247.62±8.14g，組間比較差異無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。缺血再灌注后各組左心室的重量分別為0.408±0.004g、0.405±0.008g、Ator:0.408±0.006g、Ator+LND:0.409±0.006g，各組間比較差異無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　2、造模過(guò)程中的心律失常發(fā)生率:與Sham組相比，I/R組再灌注心律失常發(fā)生率顯著升高(Sham vs I/R:7.7％ vs46.

6、2％，P=0.027)，Ator組、Ator+LND組心律失常發(fā)生率升高，但未達(dá)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(Sham vs Ator:7.7％ vs23.1％，P=0.277; Sham vs Ator+LND:7.7％ vs38.5％,P=0.063)。Ator組(23.1％)、Ator+LND組(38.5％)再灌注后心律失常發(fā)生率低于I/R組(46.2％)，但未達(dá)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　3、用缺血危險(xiǎn)區(qū)面積/左室面積(area at

7、 risk/left ventricular，AAT/LV)表示心肌缺血面積比，用梗塞面積/缺血危險(xiǎn)區(qū)面積(Infarct area/area atrisk，IA/AAR)表示梗死面積比。與I/R組相比，Ator組、Ator+LND組的AAR/LV顯著減少，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　4、透射電鏡觀察各組超微結(jié)構(gòu)變化發(fā)現(xiàn)，I/R組胞質(zhì)稀疏，分布不均，可見(jiàn)明顯水腫。線粒體膜完整性破壞，局部有空泡，嵴斷裂，排列紊亂，局部結(jié)構(gòu)消失。Ator組

8、線粒體表達(dá)豐富，結(jié)構(gòu)相對(duì)完整，可見(jiàn)輕度水腫，嵴突數(shù)目略有減少、排列欠整齊，可見(jiàn)少許空泡、線粒體破裂現(xiàn)象。
　　結(jié)論:
　　1、在體大鼠I/R模型建立成功，在缺血再灌注建模前12h阿托伐他汀(80mg/kg)灌胃可以減少I/R損傷程度，氯尼達(dá)明部份抵消阿托伐他汀的心肌保護(hù)作用，
　　2、阿托伐他汀預(yù)處理可以減少I/R損傷性心律失常的發(fā)生率。
　　3、阿托伐他汀預(yù)處理可以減輕I/R心肌細(xì)胞線粒體超微結(jié)構(gòu)損傷。

9、　　第2部分 阿托伐他汀鈣預(yù)處理對(duì)大鼠缺血再灌注心肌UCP3表達(dá)和線粒體功能的影響
　　目的:
　　探討阿托伐他汀預(yù)處理對(duì)I/R心肌UCP3表達(dá)的影響，觀察阿托伐他汀對(duì)I/R心肌線粒體功能的保護(hù)作用，以及氯尼達(dá)明對(duì)UCP3和線粒體功能的影響。
　　方法:
　　選擇SD大鼠32只，隨機(jī)分為4組（sham組、I/R組、Ator組、Ator+LND組），每組8只，建立在體I/R模型（操作如第一部分）。在再灌注2h后，立

10、即留取心臟標(biāo)本，用RT-PCR法檢測(cè)心肌UCP3基因轉(zhuǎn)錄水平，Western blot法檢測(cè)心肌UCP3蛋白表達(dá)水平，檢測(cè)心肌組織三磷酸腺苷(adenosine5' triphosphate，ATP)含量。留取血標(biāo)本檢測(cè)乳酸脫氫酶(lactatedehydrogenase，LDH)、丙二醛(Malondialdehyde，MDA)、超氧化物歧化酶(SuperOxide Dismutase，SOD)、游離脂肪酸(Free fat acid

11、，F(xiàn)FA)的含量。比較各組各個(gè)指標(biāo)之間的區(qū)別。
　　使用Graphpad Prism及SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用(x)±s表示，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，若方差齊應(yīng)用LSD法進(jìn)行組間比較，方差不齊則采用Tamhane方法進(jìn)行組間比較，P＜0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1、各組UCP3基因轉(zhuǎn)錄水平和蛋白含量的比較
　　與Sham組相比，I/R組、Ator組、Ator+LN

12、D組UCP3基因表達(dá)水平顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Sham vs I/R:1.02±0.17 vs1.42±0.21, P=0.003; Shamvs Ator:1.02±0.17 vs1.94±0.31, P＜0.001; Sham vs Ator+LND:1.02±0.17 vs1.70±0.28, P＜0.001); I/R組、Ator組、Ator+LND組UCP3蛋白含量顯著升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Sham vs I/R:0.28

13、6±0.086 vs0.420±0.092, P=0.005; Sham vs Ator:0.286±0.086 vs0.584±0.099, P＜0.001; Sham vs Ator+LND:0.286±0.08 vs0.549±0.068, P＜0.001）。
　　2、各組LDH活性的比較
　　與Sham組相比，I/R組、Ator組、Ator+LND組LDH活性均顯著升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Sham vs I/R:392.

14、59±55.56 vs3864.15±162.92U/L, P＜0.001;Shamvs Ator:392.59±55.56 vs3056.17±136.22 U/L, P＜0.001; Sham vs Ator+LND:392.59±55.56 vs3578.01±239.41 U/L, P＜0.001)。
　　3、各組血漿SOD活力的比較
　　與Sham組相比，I/R組、Ator組、Ator+LND組SOD活力明顯降低，

15、具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Sham vs I/R:178.80±7.03 vs121.17±7.09 U/ml, P＜0.001; Sham vsAtor:178.80±7.03 vs159.53±8.64 U/ml, P＜0.001; Sham vsAtor+LND:178.80±7.03 vs143.27±6.15 U/ml, P＜0.001)。
　　4、各組血漿MDA組間比較
　　與Sham組相比，I/R組、Ator組、Ator

16、+LND組MDA含量明顯升高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Sham vs I/R:2.56±0.58 vs5.02±0.72nmol/ml, P＜0.001; Sham vsAtor:2.56±0.58 vs3.49±0.40nmol/ml, P=0.002; Sham vs Ator+LND:2.56±0.58vs4.45±0.47 nmol/ml, P＜0.001)。
　　結(jié)論:
　　1、缺血再灌注使UCP3基因轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達(dá)水

17、平升高。阿托伐他汀預(yù)處理進(jìn)一步上調(diào)了UCP3基因轉(zhuǎn)錄和蛋白表達(dá)水平。氯尼達(dá)明可部分抑制阿托伐他汀上調(diào)UCP3表達(dá)的作用。
　　2、阿托伐他汀預(yù)處理可以減輕心肌的I/R損傷，其機(jī)制可能與其減輕脂質(zhì)過(guò)氧化損傷、增強(qiáng)心肌清除自由基的能力以及提高線粒體的ATP保有量有關(guān);而氯尼達(dá)明可削弱阿托伐他汀的上述作用。
　　3、阿托伐他汀對(duì)UCP3的調(diào)節(jié)可能與血漿FFA的代謝無(wú)關(guān)。
　　總結(jié):
　　缺血再灌注加重了心肌損傷，阿托伐