阿托伐他汀對(duì)大鼠腎缺血再灌注損傷中TLR4的影響.pdf

1、目的：通過(guò)觀察阿托伐他汀對(duì)大鼠腎缺血再灌注損傷中TLR4、NF-κBp65及IL-6表達(dá)的影響，從而探討阿托伐他汀的腎臟保護(hù)作用，為臨床防治腎IRI提供實(shí)驗(yàn)性理論依據(jù)。
　　 方法：雄性wistar大鼠54只隨機(jī)分為假手術(shù)組（sham組）、手術(shù)組（Ir組）、干預(yù)組（A組），每組18只大鼠，按取材時(shí)間不同（6h、24h、48h）每組又分為三個(gè)時(shí)相組，每時(shí)相組6只大鼠。手術(shù)方法：sham組：打開大鼠腹腔，分離雙側(cè)腎動(dòng)脈但不夾閉，后關(guān)

2、閉腹腔。Ir組：打開大鼠腹腔，用無(wú)創(chuàng)動(dòng)脈夾夾閉大鼠雙側(cè)腎動(dòng)脈45min后恢復(fù)灌注，制成腎IRI 模型；A組：術(shù)前灌胃阿托伐他汀鈣片10mg ﹒kg-1﹒day-1，連續(xù)7天，其余處理同Ir組。再灌注達(dá)相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)時(shí)，檢測(cè)Scr、血膽固醇以及進(jìn)行腎組織病理學(xué)觀察并采用免疫組織化法測(cè)定TLR4、NF-κBp65及IL-6蛋白的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：
　　 1.光鏡下觀察HE 染色標(biāo)本，sham組：腎組織形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰，小管上皮

3、細(xì)胞完整且整齊排列，管腔無(wú)擴(kuò)張，內(nèi)可見刷狀緣、無(wú)管型，間質(zhì)無(wú)充血、水腫及炎細(xì)胞浸潤(rùn)；Ir組：腎小球結(jié)構(gòu)無(wú)明顯變化，腎小管上皮細(xì)胞有不同程度的腫脹、壞死和脫落、排列紊亂，刷狀緣消失，管腔擴(kuò)張，可見管型，腎間質(zhì)水腫、炎細(xì)胞浸潤(rùn)明顯，尤以24h 較重；A組：腎小球無(wú)明顯的結(jié)構(gòu)異常，腎小管上皮細(xì)胞腫脹、壞死及腎間質(zhì)的水腫、炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)程度較Ir組各時(shí)間點(diǎn)明顯減輕。
　　 2.sham組中，Scr 維持在正常范圍內(nèi)（6h：39.16±1

4、.98，24h：43.51±1.92，48h：42.26±2.43）；Ir組中，Scr水平在6h時(shí)開始明顯升高（110.53±10.49），24h達(dá)到高峰（210.25±17.94），48h時(shí)有所下降（187.81±14.96）,但仍維持在較高水平；Ir組各時(shí)項(xiàng)組較sham組Scr水平差異有顯著性(P＜0.01）；A組中，各時(shí)項(xiàng)組Scr水平較Ir組明顯下降(6h：84.88±13.14，24h：175.91±12.18，48h：156.

5、80±10.71)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但仍維持在較高水平。
　　 3．在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)，A組大鼠的血總膽固醇水平較sham組差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。
　　 4.sham組中，腎組織中TLR4表達(dá)較弱（6h:0.90±0.84，24h：1.60±0.55，48h：1.00±0.70）。Ir組再灌注6h后TLR4表達(dá)開始增強(qiáng)（6h：102.20±14.24），主要表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞胞漿內(nèi)，24h后除小管受累

6、外多部位均廣泛表達(dá)（24h：182.40±14.36），48h時(shí)表達(dá)有所減弱（48h：160.40±15.90），與sham組相比差異有顯著性（P＜0.01）。A組各時(shí)相組TLR4表達(dá)水平較Ir組減弱(6h：77.80±10.08，24h：143.40±11.97，48h：127.60±12.88)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但仍維持在較高水平。
　　 5．Sham組中，腎組織中IL-6表達(dá)較弱（6h:1.00±0.71

7、，24h：1.40±0.89，48h：1.40±0.55）。Ir組再灌注6h后IL-6表達(dá)開始上調(diào)（6h：107.00±13.69），主要表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞胞漿內(nèi)，24h時(shí)IL-6表達(dá)至高峰（24h：183.00±11.18），48h時(shí)表達(dá)有所減弱（48h：167.00±15.13），與sham組相比差異有顯著性（P＜0.01）。A組各時(shí)相組IL-6表達(dá)水平較Ir組減弱(6h：79.60±10.50，24h：147.40±13.05，

8、48h：131.80±10.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但仍維持在較高水平。
　　 6.sham組中，腎組織中NF-κBp65表達(dá)較弱（6h:1.20±0.45，24h：1.80±0.45，48h：1.40±0.55）。Ir組再灌注6h后NF-κBp65表達(dá)開始增強(qiáng)（6h：92.40±15.52），主要表達(dá)于腎小管上皮細(xì)胞胞漿內(nèi)和（或）核內(nèi)，24h表達(dá)至高峰（24h：169.80±15.00），48h時(shí)表達(dá)有所回落

9、（48h：149.00±15.28），與sham組相比差異有顯著性（P＜0.01）。A組各時(shí)相組NF-κBp65表達(dá)水平較Ir組減弱(6h：64.20±12.40，24h：135.20±17.00，48h：116.40±17.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但其表達(dá)仍強(qiáng)于sham組。
　　 結(jié)論：
　　 1.夾閉雙腎動(dòng)脈45min后恢復(fù)灌注，可見腎組織明顯的病理變化，尤以腎小管損傷為重，且腎功能受損，IRI 造

10、模成功。
　　 2.IRI后，TLR4、NF-κBp65及IL-6的表達(dá)明顯上調(diào)，缺血再灌注可能通過(guò)TLR4信號(hào)途徑導(dǎo)致NF-κBp65 激活，從而激發(fā)缺血再灌注后炎癥反應(yīng)的發(fā)生。
　　 3.給予阿托伐他汀預(yù)處理，可以使腎IRI 程度減輕，Scr水平明顯下降，腎功能得到改善；同時(shí)使TLR4、NF-κBp65及IL-6的蛋白表達(dá)顯著下調(diào)，而血脂較sham組差異無(wú)顯著性。阿托伐他汀可能通過(guò)抑制TLR4信號(hào)途徑，發(fā)揮其非依賴降