傣藥帕崩板治療慢性酒精性肝病的作用機(jī)制研究.pdf

1、長期過量飲酒可導(dǎo)致酒精性脂肪肝，進(jìn)而發(fā)展為酒精性肝炎、肝纖維化甚至誘發(fā)成肝癌等一系列酒精性肝?。ˋlcoholic liver disease，ALD）。國內(nèi)外對(duì)其已有大量的研究，但西醫(yī)目前暫無有效治療ALD的藥物。我們的前期工作已經(jīng)證實(shí)了傣藥帕崩板可有效治療急性酒精暴露引起的肝損傷。因此，我們預(yù)測帕崩板可治療更為嚴(yán)重的慢性酒精性脂肪肝。
　　目的：
　　探究傣藥帕崩板治療慢性酒精性肝病的作用規(guī)律，明確其治療慢性酒精性肝病的

2、物質(zhì)基礎(chǔ)與分子機(jī)制，為臨床治療酒精性肝病提供新思路，豐富傣醫(yī)藥治療酒精性肝病的經(jīng)驗(yàn)。
　　方法：
　　1.傣藥帕崩板治療慢性酒精性脂肪肝的研究
　?。?）利用Lieber-DeCarli酒精液體飼料喂養(yǎng)小鼠8周建立慢性酒精性脂肪肝模型。在7-8周給予帕崩板醇提物、60％乙醇洗脫部位（帕崩板醇提物的主要活性部位）、綠原酸（60%乙醇洗脫部位主要成分之一），并選用臨床上的保肝藥物水飛薊素作為陽性對(duì)照，分別進(jìn)行干預(yù)。

3、　?。?）在組織學(xué)上，評(píng)價(jià)帕崩板對(duì)酒精誘導(dǎo)脂質(zhì)蓄積的改善情況。本部分檢測了小鼠體重和肝臟指數(shù)，利用H&E和油紅O染色檢測肝組織脂質(zhì)蓄積情況，并對(duì)上述兩種染色進(jìn)行定量。
　?。?）在血清學(xué)上，評(píng)價(jià)帕崩板對(duì)酒精所致異常肝功能的改善情況。檢測小鼠血清中AST、ALT、TCHO、TG、DLC和HDLC等生化指標(biāo)；利用鱟試劑法檢測小鼠血清內(nèi)毒素的含量；以 FITC-D4作為檢測腸黏膜通透性的指示劑表征腸粘膜通透性；用頂空氣相色譜法檢測小鼠血

4、酒精濃度。
　?。?）在分子水平上，研究帕崩板治療酒精性肝病的分子機(jī)制。利用 RT-PCR法檢測小鼠肝組織中脂肪酸代謝相關(guān)因子 SREBP-1c、FASN、ACC和 SCD-1 mRNA等表達(dá)量；Western blot法檢測固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1c（SREBP-1c）及其上游信號(hào)MAPKs（p44/42和p38）、AMPK和下游信號(hào)ACC的表達(dá)和活性。
　　2.帕崩板有效部位協(xié)同改善其中綠原酸腸吸收
　　在前期研究

5、篩選出了帕崩板抗急性酒精性肝病有效部位（active fraction of G. procumbens，AFG，含綠原酸13.4%，對(duì)香豆?？崴?.6%）的基礎(chǔ)上，研究其在大鼠腸道的吸收特性。建立大鼠在體單向腸灌流模型，采用重量法檢測三種pH（7.8、6.9、5.5）下的AFG和綠原酸純品在回腸的吸收值，pH7.8時(shí)AFG吸收最大，進(jìn)一步檢測pH7.8時(shí)AFG在十二指腸、空腸、結(jié)腸的吸收。
　　結(jié)果：
　　1.帕崩板醇提

6、物及其有效成分（60%乙醇洗脫部位、綠原酸）可逆轉(zhuǎn)酒精誘導(dǎo)的小鼠血清肝功能的異常和脂質(zhì)蓄積情況。在分子水平上，酒精誘導(dǎo)小鼠體內(nèi)脂肪化合成和氧化相關(guān)因子表達(dá)增加、MAPK（p44/42和p38）的磷酸化作用降低、SREBP-1c剪切成熟和ACC活性增加。帕崩板醇提物及60%乙醇洗脫部位逆轉(zhuǎn)酒精誘導(dǎo)的MAPK/SREBP-1c信號(hào)通路中蛋白表達(dá)水平，恢復(fù)脂質(zhì)代謝因子平衡，治療酒精性脂肪肝；而綠原酸雖可逆轉(zhuǎn)酒精誘導(dǎo)的ACC等脂質(zhì)代謝因子失衡，

7、卻沒有改變MAPK/SREBP-1c信號(hào)通路中蛋白表達(dá)水平。本實(shí)驗(yàn)中各組小鼠體重和炎癥相關(guān)因子TNF-α和IL-1βmRNA的表達(dá)量均沒有顯著性變化。
　　2.在回腸中，pH5.5時(shí)綠原酸純品吸收最大，然而，AFG中的綠原酸在 pH7.8時(shí)吸收最大。
　　結(jié)論：
　　1.傣藥帕崩板能有效治療慢性酒精性脂肪肝
　　帕崩板通過MAPK/SERBP-1c依賴和非依賴途徑（其中綠原酸是經(jīng)非依賴性途徑）調(diào)節(jié)肝臟脂質(zhì)代謝相關(guān)