基于臨床生化指標(biāo)的冠心病預(yù)測(cè)模型建立及其與基因易感性關(guān)聯(lián)的探索研究.pdf

1、冠心病(coronary heart disease，CHD)是威脅人類健康的主要疾病。最新統(tǒng)計(jì)顯示，在發(fā)達(dá)國(guó)家，CHD的死亡率雖然有所下降，但在發(fā)展中國(guó)家，包括中國(guó)，CHD的死亡率仍呈上升趨勢(shì)。據(jù)WHO估計(jì)，到2020年左右我國(guó)將會(huì)迎來(lái)CHD的流行高峰。因此提高CHD預(yù)防控制水平是我國(guó)一項(xiàng)艱巨任務(wù)。
　　目的:
　　主要有以下幾方面:
　　1.選擇玉溪地區(qū)漢族健康人群及CHD人群，收集人群的常規(guī)生理生化指標(biāo)，通過(guò)統(tǒng)計(jì)

2、學(xué)分析，明確各指標(biāo)與CHD的相關(guān)性及相關(guān)模式，嘗試建立對(duì)CHD具有較高診斷效能的評(píng)估模型。
　　2.通過(guò)病例對(duì)照研究，探討SDF-1基因3'端rs1801157位點(diǎn)SNP與玉溪地區(qū)漢族CHD人群間的相關(guān)性，比較玉溪地區(qū)主要民族漢族、彝族、哈尼族和傣族該基因位點(diǎn)基因型及等位基因頻率的差異，并與國(guó)內(nèi)外已有研究結(jié)果進(jìn)行比較，了解該基因位點(diǎn)的民族或種族差異性。
　　3.通過(guò)病例對(duì)照研究，探討hTERT編碼基因1號(hào)內(nèi)含子rs27361

3、00位點(diǎn)SNP與玉溪地區(qū)漢族CHD人群間的相關(guān)性，比較玉溪地區(qū)主要民族漢族、彝族、哈尼族和傣族該基因位點(diǎn)基因型及等位基因頻率的差異，了解該基因位點(diǎn)的民族差異性。
　　4.通過(guò)將第一章基于傳統(tǒng)危險(xiǎn)因子得到的數(shù)學(xué)評(píng)估模型運(yùn)用于第二和第三章研究對(duì)象中，除可再次驗(yàn)證模型的有效性和重復(fù)性，還希望能從中發(fā)現(xiàn)基因易感性與傳統(tǒng)危險(xiǎn)因子間的關(guān)聯(lián)性，探索基因易感性與傳統(tǒng)危險(xiǎn)因子聯(lián)合運(yùn)用的可能性。
　　方法:
　　第一章:玉溪地區(qū)漢族人群冠

4、心病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估數(shù)學(xué)模型的建立與臨床評(píng)價(jià)
　　1.1研究對(duì)象
　　1.1.1建立數(shù)學(xué)模型所用研究對(duì)象
　　選擇2010年10月至2013年3月我院心內(nèi)科確診的CHD患者男性664例為男性病例組;女性385例為女性病例組。選擇同期健康體檢者男性400例為男性對(duì)照組，女性227例為女性對(duì)照組。
　　1.1.2驗(yàn)證數(shù)學(xué)模型所用研究對(duì)象
　　選擇2013年11月至2014年12月我院心內(nèi)科確診的CHD患者男性312例為

5、男性病例組;女性119例為女性病例組。選擇同期健康體檢者男性198例為男性對(duì)照組、女性214例為女性對(duì)照組。
　　1.2方法:
　　1.2.1生化檢測(cè)項(xiàng)目及方法
　　實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)以下血清生化指標(biāo):總膽固醇、甘油三酯、HDL-C、LDL-C、UA、同型半胱氨酸、載脂蛋白A1、載脂蛋白B100、脂蛋白a、TBIL、直接膽紅素、γ-GT。均使用瑞士原裝進(jìn)口Roche cobas c701全自動(dòng)生化分析儀及配套試劑進(jìn)行檢測(cè)。

6、r>　　1.2.2CHD發(fā)病預(yù)測(cè)模型的建立方法及統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
　　采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。變量按照男女分層，所有納入變量首先需經(jīng)過(guò)分布規(guī)律觀察，掌握其集中和離散趨勢(shì);對(duì)于偏態(tài)分布的變量實(shí)施合理數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換，轉(zhuǎn)換后重新評(píng)估其分布特征;正態(tài)分布變量用(X)±s描述，偏態(tài)分布變量用四分位數(shù)M(P25，P75)描述，兩組間均數(shù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05;運(yùn)用Pearson Correlation coeff

7、icient矩陣來(lái)確定變量間的相關(guān)關(guān)系。
　　第二章:玉溪地區(qū)漢族人群基質(zhì)細(xì)胞衍生因子基因多態(tài)性與冠心病相關(guān)性研究
　　2.1研究對(duì)象
　　收集2013年4月至2013年10月在我院心內(nèi)科確診的漢族CHD患者84例為病例組。收集同期進(jìn)行健康體檢的漢族人群257例為對(duì)照組，但有4例樣本實(shí)驗(yàn)中未檢測(cè)出質(zhì)譜信號(hào)，故未能成功分型，最終253例（納入對(duì)照組研究。
　　2.2方法:
　　2.2.1生化檢測(cè)項(xiàng)目及方法

8、r>　　均使用瑞士原裝進(jìn)口Roche cobas c701全自動(dòng)生化分析儀及配套試劑檢測(cè)了TC、TG、HDL-C、LDL-C、UA、HCY、APOA1、APOB100、Lp(a)、TBIL、DBIL、γ-GT共計(jì)12項(xiàng)生化指標(biāo)。
　　2.2.2基因組DNA提取、擴(kuò)增及SNP檢測(cè)
　　按照QIAamp DNA Blood Mini Kit(Gaithersburg，MD)廠商說(shuō)明書從全血中提取100uL基因組DNA，將提取的D

9、NA溶解于20mL含1mmolEDTA的Tris-HCl緩沖液(pH8.0)中，儲(chǔ)存于-30℃?zhèn)溆谩?br>　　2.2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
　　采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。根據(jù)質(zhì)譜結(jié)果，計(jì)算基因位點(diǎn)基因型頻率及等位基因頻率，應(yīng)用Hardy-Weinberg平衡方程計(jì)算出人群中每個(gè)等位基因3種基因型的理論值，然后與實(shí)際值進(jìn)行比較（x2檢驗(yàn)），以明確其分布是否符合Hardy-Weinberg平衡。計(jì)數(shù)資料比較采用x2檢驗(yàn)。<

10、br>　　第三章:玉溪地區(qū)漢族人群端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶基因多態(tài)性與冠心病相關(guān)性研究
　　3.1研究對(duì)象
　　研究對(duì)象中病例組情況同第二章。對(duì)照組257例樣本在該位點(diǎn)均成功分型，故全部納入對(duì)照組研究，其中。研究對(duì)象入選及排除標(biāo)準(zhǔn)、標(biāo)本的采集及處理同第二章。
　　3.2方法:
　　3.2.1生化檢測(cè)項(xiàng)目及方法
　　均使用瑞士原裝進(jìn)口Roche cobas c701全自動(dòng)生化分析儀及配套試劑檢測(cè)了TC、TG、HDL-C

11、、LDL-C、UA、HCY、APOA1、APOB100、Lp(a)、TBIL、DBIL、γ-GT共計(jì)12項(xiàng)生化指標(biāo)。
　　3.2.2基因組DNA提取、擴(kuò)增及SNP檢測(cè)
　　基因組DNA提取及擴(kuò)增方法同第二章。hTERT基因1號(hào)內(nèi)含子rs2736100位點(diǎn)用于擴(kuò)增的上游引物序列為5'ACGTTGGATGTGACACCCCCACAAGCTAAG3'，下游引物序列為5' ACGTTGGATGACAAAGGAGGAAAAGCAGGG

12、3'。延伸引物序列為5' TCCGTGTTGAGTGTTTCT3'。同樣采用Mass Array檢測(cè)技術(shù)測(cè)定hTERT基因1號(hào)內(nèi)含子rs2736100位點(diǎn)基因型在84例CHD患者和257例健康對(duì)照者中的分布情況。
　　2.2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
　　同第二章。
　　第四章:基因易感性與數(shù)學(xué)評(píng)估模型聯(lián)合運(yùn)用探索
　　4.1研究對(duì)象
　　分別為第二章中的病例組84例漢族CHD患者，對(duì)照組253例健康體檢漢族人群;第三

13、章中的病例組84例漢族CHD患者，對(duì)照組257例健康體檢漢族人群。
　　4.2方法:
　　4.2.1研究方法
　　將第一章基于傳統(tǒng)危險(xiǎn)因子得到的數(shù)學(xué)評(píng)估模型運(yùn)用于第二和第三章研究對(duì)象中，計(jì)算每例樣本的模型值，按不同性別，分別比較兩組人群病例組和對(duì)照組的差異，以及不同等位基因或基因型間模型值的差異。
　　4.2.2統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
　　采用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件包，建立數(shù)據(jù)庫(kù)。計(jì)量資料用(X)±s表示，多樣本均數(shù)

14、間比較采用方差分析，兩樣本均數(shù)間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　結(jié)果:
　　第一章:玉溪地區(qū)漢族人群冠心病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估數(shù)學(xué)模型的建立與臨床評(píng)價(jià)
　　通過(guò)嚴(yán)格質(zhì)量控制的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，對(duì)臨床生化指標(biāo)實(shí)施合理篩選，可極大提高預(yù)測(cè)CHD的診斷效能。
　　第二章:玉溪地區(qū)漢族人群基質(zhì)細(xì)胞衍生因子基因多態(tài)性與冠心病相關(guān)性研究
　　rs1801157位點(diǎn)病例組基因型分布頻率如下:G/G為50例(59.5％)

15、，G/A為30例(35.7％)，A/A為4例(4.8％)。對(duì)照組基因型分布頻率如下:G/G為120例(47.4％)，G/A為111例(43.9％)，A/A為22例(8.7％)。各基因型間差異無(wú)顯著性。病例組G和A等位基因分布頻率分別為77.4％和22.6％，對(duì)照組G和A等位基因分布頻率分別為69.4％和30.6％。病例組G等位基因頻率高于對(duì)照組(P=0.047)，差異存在顯著性。
　　第三章:玉溪地區(qū)漢族人群端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶基因多態(tài)

16、性與冠心病相關(guān)性研究
　　rs2736100位點(diǎn)病例組基因型分布頻率如下:G/G為15例(17.9％)，G/T為48例(57.1％)，T/T為21例(25.0％)。對(duì)照組基因型分布頻率如下:G/G為25例(9.7％)，G/T為171例(66.5％)，T/T為61例(23.7％)。病例組G/G基因型頻率高于對(duì)照組(P=0.044)，差異存在顯著性。
　　第四章:基因易感性與數(shù)學(xué)評(píng)估模型聯(lián)合運(yùn)用探索
　　在rs180115

17、7和rs2736100兩個(gè)基因位點(diǎn)，男性和女性病例組模型計(jì)算值均高于對(duì)照組，差異有顯著性意義;在rs1801157位點(diǎn)，男性G等位基因組模型計(jì)算值高于A等位基因組模型計(jì)算值，而女性G等位基因組模型計(jì)算值低于A等位基因組模型計(jì)算值;在rs2736100位點(diǎn)，男性和女性均為易感基因型G/G組模型計(jì)算值最高。
　　結(jié)論:
　　1.通過(guò)嚴(yán)格質(zhì)量控制的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，對(duì)常見生化指標(biāo)實(shí)施合理篩選，可以得到較為理想的CHD風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估模型。

18、>　　2.病例對(duì)照研究顯示，SDF-1基因rs1801157位點(diǎn)G等位基因可能為玉溪地區(qū)漢族人群CHD的相關(guān)危險(xiǎn)因素，該基因位點(diǎn)SNP存在民族或種族差異性。
　　3.病例對(duì)照研究顯示，hTERT基因rs2736100位點(diǎn)G/G基因型可能為玉溪地區(qū)漢族人群CHD的相關(guān)危險(xiǎn)因素，不同民族間該位點(diǎn)SNP存在差異性。
　　4.基因易感性與風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估數(shù)學(xué)模型間存在一定關(guān)聯(lián)性，將基因易感性因素與傳統(tǒng)危險(xiǎn)因子進(jìn)行有機(jī)結(jié)合，可能會(huì)完善和提高對(duì)