影響硫氧還蛋白亞細(xì)胞定位的甘草有效組分研究.pdf

1、當(dāng)前國家社會快速進(jìn)步，百姓生活消費(fèi)實(shí)力也在穩(wěn)步提升。然而由于發(fā)展所帶來的一系列污染問題以及人們長期養(yǎng)成的不良生活習(xí)慣等方面，都可能會導(dǎo)致人體內(nèi)部正常的細(xì)胞周期發(fā)生紊亂，進(jìn)而會使細(xì)胞生理功能等方面出現(xiàn)嚴(yán)重失調(diào)，最終惡化演變?yōu)椤鞍┌Y”。
　　硫氧還蛋白（Thioredoxin-1,Trx）屬于分布比較寬泛的小分子多功能蛋白，其在進(jìn)化上比較保守且同屬氧化還原類蛋白家族。目前對多種腫瘤細(xì)胞系的研究顯示，Trx表達(dá)水平與腫瘤細(xì)胞耐藥性之間存

2、在正比例關(guān)系；與此同時(shí)，相關(guān)臨床探索也證實(shí)了 Trx表達(dá)水平較高的癌癥病人更容易對多種化療藥物產(chǎn)生顯著抗藥性。這主要是由于化療藥物可刺激Trx入核使其保持還原狀態(tài)，進(jìn)而通過增強(qiáng)相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的活性使腫瘤細(xì)胞具有抵抗凋亡繼而抗藥的能力。因此將Trx作為一個(gè)潛在抗癌治療靶點(diǎn)具有非常重要的價(jià)值意義。
　　中醫(yī)在我國的發(fā)展歷史悠久，由于其來源豐富且毒副作用小，因此廣受病患青睞。所以探尋有效抗癌天然藥物的任務(wù)也十分緊迫。本論文主要通過采用甘草

3、天然混合組分及其主要單藥活性成分作用于人宮頸癌HeLa細(xì)胞，從而使用相關(guān)方法與手段對Trx在亞細(xì)胞中的定位作用進(jìn)行了一系列探究。
　　首先，采用復(fù)方甘草片（其內(nèi)主要成分為甘草浸膏）作為實(shí)驗(yàn)藥物設(shè)置相同藥物濃度不同作用時(shí)間實(shí)驗(yàn)組和相同作用時(shí)間不同藥物濃度實(shí)驗(yàn)組。Western blot結(jié)果顯示兩組中，Trx在其細(xì)胞核與細(xì)胞漿內(nèi)的表達(dá)變化均隨著藥物濃度的增大和作用時(shí)間的延長呈現(xiàn)下降趨勢。因此推測在甘草中存在相關(guān)有效組分，從而對Trx在

4、亞細(xì)胞中的定位下降起到了重要作用。
　　然后，依次采用甘草酸（皂苷類藥物）、甘草苷（黃酮類藥物）兩種主要單藥活性成分作為實(shí)驗(yàn)藥物設(shè)置相同藥物濃度不同作用時(shí)間實(shí)驗(yàn)組和相同作用時(shí)間不同藥物濃度實(shí)驗(yàn)組。Western blot結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩組中，Trx在其細(xì)胞核與細(xì)胞漿的定位表達(dá)均伴隨著藥物濃度增大與作用時(shí)間延長呈下降趨勢。因此證明了這兩種單藥活性成分對于Trx在亞細(xì)胞中的定位下降起到了重要作用，它們即為甘草中能夠抑制Trx入核的有效組分。

5、與此同時(shí)，再將三七皂苷R1（皂苷類藥物）和蕓香葉苷（黃酮類藥物）兩種佐證藥物按照上述實(shí)驗(yàn)設(shè)置作用 HeLa細(xì)胞，Western blot結(jié)果發(fā)現(xiàn)二者對Trx在亞細(xì)胞中的含量變化無明顯作用。因此說明了甘草酸、甘草苷對于Trx在亞細(xì)胞中的定位下降是非常有效的。
　　最后，再將甘草酸、甘草苷兩種單藥分別與抗癌藥物順鉑、紫杉醇、表柔比星進(jìn)行“兩兩聯(lián)合”設(shè)置藥物實(shí)驗(yàn)組。Western blot及四甲基偶氮唑鹽（MTT）比色法結(jié)果表明甘草對細(xì)