含色氨酸抗菌肽對多藥耐藥表皮葡萄球菌抗菌機制的研究.pdf

1、多藥耐藥表皮葡球菌由于缺少合適的抗菌藥物已經成為造成醫(yī)院內引起感染的主要病原體，因此新型抗菌藥物的研發(fā)已刻不容緩?？咕牟灰桩a生細菌耐藥性，具有穩(wěn)定性強、廣譜抗菌等特點，有望成為替代常規(guī)抗生素的新型藥物。
　　我們從中國林蛙皮膚分泌物中分離出天然抗菌肽temporin-1CEb并用賴氨酸(Lys)替換疏水面的Leu和Pro從而獲得改造肽L-K6，研究發(fā)現L-K6具有廣譜抗菌活性，且其溶血活性較低。前期研究發(fā)現含Trp的LK-6改造

2、肽對敏感細菌和耐藥細菌具有不同的抗菌效果，抗菌機制研究表明改造肽能夠通過凈電作用與細菌表面電荷結合，進而破壞細胞膜完整性。本論文選取一系列在特殊位點用色氨酸(Trp)替換的L-K6改造肽，以臨床多藥耐藥的表皮葡萄球菌為研究對象，研究改造肽對細菌biofilm、細菌外膜、生物膜基因表達等方面的影響。
　　研究結果顯示:I1W在濃度為3.12μM時對兩種細菌的biofilm分解能力和形成抑制能力都達到最佳。因此對兩種細菌抗菌作用差異不

3、明顯。I4W在濃度為6.25μM時對兩種細菌的biofilm形成抑制能力都達到最大值，但對敏感細菌biofilm的抑制能力大于耐藥菌，而且I4W對耐藥菌外膜滲透能力遠低于敏感菌株。這可能是I4W對兩種細菌MIC值造成差異的原因。L5W和L11W對耐藥表皮葡萄球菌只有在MIC值濃度時才能最大程度抑制biofilm的形成，而且高濃度下對耐藥菌biofilm分解作用低于敏感菌。L5W對耐藥菌外膜滲透能力強于敏感菌株。與其他抗菌肽相比，L12W

4、對耐藥菌biofilm的形成抑制作用顯著降低。與敏感菌相比，I1WL5W和I4WL5W在較高濃度下才能對耐藥菌的biofilm的形成發(fā)揮抑制作用，而且I4WL5W對耐藥菌biofilm分解作用小于敏感菌。實時熒光定量PCR實驗表明，利用20μM的七種抗菌肽分別作用于耐藥菌株24h后，icaA和icaD基因的表達都有不同程度的下調，其中L12W抑制基因表達作用最小，icaA和icaD兩個基因表達差異不顯著。
　　研究結果表明，在LK