內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)降解通路小分子抑制劑對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用以及腫瘤干細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激調(diào)控機(jī)制研究.pdf

1、本文從以下幾部分進(jìn)行了論述：
　　第一部分 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)降解通路小分子抑制劑與傳統(tǒng)抗癌藥物聯(lián)合運(yùn)用對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用
　　目的：
　　探究?jī)?nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)降解通路(Endoplasmic Reticulum-Associated Degradation，ERAD)小分子抑制劑EeyarestatinI(EerI)與傳統(tǒng)抗癌藥物聯(lián)合運(yùn)用對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制作用。
　　方法：
　　不同劑量的EerI處理結(jié)腸癌SW480和

2、胰腺癌PANC-1細(xì)胞，MTS法檢測(cè)細(xì)胞增殖，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率;EerI單獨(dú)或與抗癌藥物順鉑(cisplatin，CDDP)和硼替佐米(Bortezomib，BTZ)聯(lián)用處理SW480和PANC-1細(xì)胞，MTS法檢測(cè)細(xì)胞增殖，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率，Western blot法檢測(cè)細(xì)胞中Poly ADP-ribosepolymerase（PARP）及其剪切體和糖調(diào)節(jié)蛋白（GRP78/BiP）的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：

3、　　EerI抑制SW480和PANC-1細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡(P＜0.01)，且呈劑量-效應(yīng)關(guān)系;聯(lián)合用藥的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示EerI提高了SW480和PANC-1細(xì)胞對(duì)CDDP和BTZ的敏感性(P＜0.01);Westernblot結(jié)果表明，聯(lián)合用藥促進(jìn)了PARP在SW480和PANC-1細(xì)胞中的剪切，同時(shí)BTZ處理可提高BiP蛋白的表達(dá)，提示了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(Endoplasmic Reticulum stress，ERS)反應(yīng)的激活。

4、r>　　結(jié)論 ERAD通路抑制劑EerI可明顯增強(qiáng)傳統(tǒng)抗癌藥物CDDP和BTZ的抗癌活性，這為抗癌新藥研發(fā)及腫瘤耐藥性逆轉(zhuǎn)劑的研究提供了新的線索。
　　第二部分 探索腫瘤干細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)
　　目的：
　　建立以成球培養(yǎng)法為主的體外富集人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231腫瘤干細(xì)胞(Breast cancer stem cell，BCSC)的方法，并運(yùn)用內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)(endoplasmicreticulum stre

5、ss，ERS)誘導(dǎo)劑處理腫瘤干細(xì)胞，探究其內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)的變化以及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)對(duì)干性的影響并對(duì)其機(jī)制進(jìn)行初步探索。
　　方法：
　　采用無血清低吸附板培養(yǎng)MDA-MB-231細(xì)胞，獲得細(xì)胞球，裸鼠實(shí)驗(yàn)檢測(cè)其體內(nèi)成瘤能力，RT-PCR，Western Blot檢測(cè)其干性標(biāo)志物及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)標(biāo)志物在mRNA和蛋白水平的表達(dá);將內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)劑Tunicamycin和Thapsigargin加入成球培養(yǎng)基，檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對(duì)成球

6、的影響以及干性標(biāo)志在RNA和蛋白水平的變化;結(jié)晶紫試驗(yàn)檢測(cè)Tunicamycin和thapsigargin對(duì)2D成克隆能力的影響;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)Tunicamycin對(duì)貼壁培養(yǎng)的MDA-MB-231細(xì)胞ALDH+細(xì)胞側(cè)群的影響;Western Blot檢測(cè)不同程度的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激對(duì)與干性相關(guān)的蛋白質(zhì)如Skp2等的影響。
　　結(jié)果：
　　體外無血清培養(yǎng)，一周可獲得較大的乳腺癌細(xì)胞球，其高表達(dá)Sox2、Nanog、Oct4等干性標(biāo)志