內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)降解通路小分子抑制劑對腫瘤細胞的抑制作用以及腫瘤干細胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激調(diào)控機制研究.pdf

1、本文從以下幾部分進行了論述：
　　第一部分 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)降解通路小分子抑制劑與傳統(tǒng)抗癌藥物聯(lián)合運用對腫瘤細胞的抑制作用
　　目的：
　　探究內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)降解通路(Endoplasmic Reticulum-Associated Degradation，ERAD)小分子抑制劑EeyarestatinI(EerI)與傳統(tǒng)抗癌藥物聯(lián)合運用對腫瘤細胞的抑制作用。
　　方法：
　　不同劑量的EerI處理結(jié)腸癌SW480和

2、胰腺癌PANC-1細胞，MTS法檢測細胞增殖，流式細胞儀檢測細胞凋亡率;EerI單獨或與抗癌藥物順鉑(cisplatin，CDDP)和硼替佐米(Bortezomib，BTZ)聯(lián)用處理SW480和PANC-1細胞，MTS法檢測細胞增殖，流式細胞儀檢測細胞凋亡率，Western blot法檢測細胞中Poly ADP-ribosepolymerase（PARP）及其剪切體和糖調(diào)節(jié)蛋白（GRP78/BiP）的蛋白表達。
　　結(jié)果：

3、　　EerI抑制SW480和PANC-1細胞增殖、促進細胞凋亡(P＜0.01)，且呈劑量-效應關(guān)系;聯(lián)合用藥的實驗結(jié)果顯示EerI提高了SW480和PANC-1細胞對CDDP和BTZ的敏感性(P＜0.01);Westernblot結(jié)果表明，聯(lián)合用藥促進了PARP在SW480和PANC-1細胞中的剪切，同時BTZ處理可提高BiP蛋白的表達，提示了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激(Endoplasmic Reticulum stress，ERS)反應的激活。

4、r>　　結(jié)論 ERAD通路抑制劑EerI可明顯增強傳統(tǒng)抗癌藥物CDDP和BTZ的抗癌活性，這為抗癌新藥研發(fā)及腫瘤耐藥性逆轉(zhuǎn)劑的研究提供了新的線索。
　　第二部分 探索腫瘤干細胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激反應
　　目的：
　　建立以成球培養(yǎng)法為主的體外富集人乳腺癌細胞MDA-MB-231腫瘤干細胞(Breast cancer stem cell，BCSC)的方法，并運用內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激反應(endoplasmicreticulum stre

5、ss，ERS)誘導劑處理腫瘤干細胞，探究其內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激反應的變化以及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激反應對干性的影響并對其機制進行初步探索。
　　方法：
　　采用無血清低吸附板培養(yǎng)MDA-MB-231細胞，獲得細胞球，裸鼠實驗檢測其體內(nèi)成瘤能力，RT-PCR，Western Blot檢測其干性標志物及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關(guān)標志物在mRNA和蛋白水平的表達;將內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激誘導劑Tunicamycin和Thapsigargin加入成球培養(yǎng)基，檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激對成球

6、的影響以及干性標志在RNA和蛋白水平的變化;結(jié)晶紫試驗檢測Tunicamycin和thapsigargin對2D成克隆能力的影響;流式細胞術(shù)檢測Tunicamycin對貼壁培養(yǎng)的MDA-MB-231細胞ALDH+細胞側(cè)群的影響;Western Blot檢測不同程度的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激對與干性相關(guān)的蛋白質(zhì)如Skp2等的影響。
　　結(jié)果：
　　體外無血清培養(yǎng)，一周可獲得較大的乳腺癌細胞球，其高表達Sox2、Nanog、Oct4等干性標志