CXCR1-2拮抗劑G31P在小鼠特應(yīng)性皮炎中抗炎作用的研究.pdf

1、目的:
　　探討特應(yīng)性皮炎小鼠模型中CXCR1/2拮抗劑G31P的抗炎作用。
　　材料和方法:
　　1、動物分組及模型的建立:BALB/c小鼠60只隨機(jī)分成特應(yīng)性皮炎組(AD組)、G31P治療組和對照組,每組20只。根據(jù)Spergel[1]等外用卵清蛋白(ovalbumin,OVA)致敏小鼠的方法,建立特應(yīng)性皮炎動物模型,AD組和G31P治療組用100μl（1μg/μl）的卵清蛋白溶液腹部經(jīng)皮致敏小鼠,每周3次,間隔兩

2、周重復(fù)1次,步驟同第一周,共重復(fù)2次。對照組給予相同劑量的生理鹽水。G31P治療組小鼠在每次致敏的前一天和致敏后第7天局部皮下注射20μl(0.25μg/μl)的IL-8受體CXCR1/2拮抗劑G31P。
　　2、標(biāo)本的采集:小鼠致敏結(jié)束24 h后,處死小鼠,取腹部致敏部位皮膚組織。
　　3、檢測方法:(1)觀察各組小鼠瘙癢情況及致敏處皮損情況。(2)HE染色法檢測各組小鼠皮膚組織病理學(xué)改變。(3)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELIS

3、A)檢測各組小鼠致敏局部皮膚組織勻漿液中炎癥細(xì)胞因子IL-4、IL-8的水平。(4)PCR檢測各組小鼠皮膚組織炎癥細(xì)胞因子（IL-4、IL-8、IL-6、IL-10）mRNA的水平。(5)Western Blot和免疫組化檢測各組小鼠皮膚組織轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的表達(dá)。(6)免疫組化法檢測各組小鼠皮膚組織GRO-α的表達(dá)。(7)皮膚組織髓過氧化物酶(MPO)活性檢測分析各組小鼠皮膚組織中性粒細(xì)胞的浸潤情況。
　　結(jié)果:
　　1

4、、通過對各組小鼠致敏及治療過程中搔抓現(xiàn)象及皮損程度的觀察:對照組小鼠全程無明顯的搔抓現(xiàn)象,致敏處皮膚光滑未出現(xiàn)明顯病理改變;AD組小鼠會出現(xiàn)頻繁的搔抓現(xiàn)象,致敏處的皮膚出現(xiàn)紅斑、結(jié)痂、脫屑等典型特應(yīng)性皮炎外觀改變;G31P治療組小鼠水腫及脫屑現(xiàn)象較AD組均有明顯的減輕,提示G31P能夠明顯抑制OVA誘導(dǎo)的特應(yīng)性皮炎引起的小鼠局部皮損,具有調(diào)節(jié)改善特應(yīng)性皮炎的作用。
　　2、各組小鼠皮膚組織的HE染色結(jié)果顯示,AD組小鼠皮膚表皮明顯

5、增厚,真皮層有大量炎癥細(xì)胞浸潤,G31P治療組的小鼠皮膚表皮輕微增厚,有少量炎癥細(xì)胞浸潤,對照組小鼠皮膚組織未見炎癥病理改變,提示G31P可能對特應(yīng)性皮炎的炎癥反應(yīng)有減輕或抑制作用。
　　3、各組小鼠皮膚組織勻漿液的ELISA結(jié)果顯示,經(jīng)G31P治療后的小鼠皮膚組織勻漿液中的炎癥細(xì)胞因子IL-4、IL-8的表達(dá)(10.76±5.6,7.69±2.19,ng/L)顯著低于AD組(27.12±6.3,16.69±2.36,ng/L)(

6、P＜0.01),但明顯高于對照組(4.18±2.15,3.04±1.18,ng/L)(P＜0.01),提示G31P可以降低特應(yīng)性皮炎皮膚組織勻漿液中炎性因子（IL-4、IL-8）的表達(dá)水平,從而對特應(yīng)性皮炎的炎癥反應(yīng)起到一定的抑制作用。
　　4、PCR檢測各組小鼠皮膚組織部分炎癥細(xì)胞因子mRNA的水平,結(jié)果顯示,AD組小鼠皮膚組織中細(xì)胞因子IL-4、IL-8、IL-6、IL-10 mRNA的水平明顯高于對照組(P＜0.05),經(jīng)G

7、31P治療后的小鼠皮膚組織中的上述細(xì)胞因子mRNA水平顯著降低(P＜0.05)。提示G31P可以降低特應(yīng)性皮炎皮膚組織中炎癥因子(IL-4、IL-8、IL-6、IL-10)的mRNA水平,從而一定程度的抑制特應(yīng)性皮炎的炎癥反應(yīng)。
　　5、用Western Blot、免疫組化方法檢測各組小鼠皮膚組織中轉(zhuǎn)錄因子NF-κB蛋白的表達(dá),Western Blot和免疫組化檢測結(jié)果均顯示,AD組小鼠轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的表達(dá)明顯高于對照組(P＜

8、0.05),而G31P治療組的小鼠轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的表達(dá)明顯低于AD組(P＜0.05),提示G31P對炎癥反應(yīng)中轉(zhuǎn)錄因子NF-κB蛋白表達(dá)有一定的抑制作用。
　　6、各組小鼠皮膚組織免疫組化結(jié)果顯示,AD組小鼠皮膚組織中的GRO-α高表達(dá),經(jīng)G31P治療后GRO-α的表達(dá)明顯降低(P＜0.05),對照組中GRO-α幾乎不表達(dá)。提示G31P可以抑制炎癥反應(yīng)中GRO-α的表達(dá)。
　　7、各組小鼠皮膚組織勻漿液MPO檢測結(jié)果顯示

9、,AD組小鼠MPO活性(34.69±6.3,U/g)明顯高于對照組(11.56±1.79,U/g)(P＜0.01),G31P治療組MPO活性(20.98±8.61,U/g)低于AD組,兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01),表明G31P對特應(yīng)性皮炎的炎癥反應(yīng)中皮損部位的中性粒細(xì)胞浸潤有一定抑制作用,從而減輕炎癥損傷。
　　結(jié)論:
　　1、AD組小鼠皮膚組織中IL-8的表達(dá)明顯升高,故可推測IL-8在特應(yīng)性皮炎的炎癥反應(yīng)中起重要