衰老大鼠血管和心肌細(xì)胞骨架的改變及人參三七川芎提取物的干預(yù)作用.pdf

1、人口老齡化是當(dāng)今世界的發(fā)展趨勢(shì)。隨著年齡的增長(zhǎng)，機(jī)體各組織器官的結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，功能逐漸下降，健康狀況隨之惡化。其中血管隨年齡增長(zhǎng)而發(fā)生的退行性病變稱為血管老化。有研究表明，血管老化是老年人患心血管疾病的一個(gè)危險(xiǎn)因素，因此進(jìn)行血管老化的相關(guān)研究對(duì)于防治心血管疾病具有重要意義。細(xì)胞骨架是真核細(xì)胞中的動(dòng)態(tài)蛋白網(wǎng)絡(luò)體系，參與細(xì)胞的多種功能。細(xì)胞骨架的完整性和穩(wěn)定性對(duì)于維持血管和心肌的形態(tài)必不可少，其結(jié)構(gòu)的改變勢(shì)必會(huì)影響血管和心肌的功能。本實(shí)驗(yàn)通

2、過(guò)構(gòu)建自然衰老大鼠模型并進(jìn)行相關(guān)研究，旨在進(jìn)一步探討衰老過(guò)程中血管和心肌細(xì)胞骨架的改變，以及益氣活血中藥的干預(yù)作用，為中藥延緩衰老提供新的依據(jù)。
　　本研究分為兩部分:文獻(xiàn)綜述和實(shí)驗(yàn)研究。
　　1、文獻(xiàn)綜述:以細(xì)胞骨架為切入點(diǎn)歸納了血管老化過(guò)程中細(xì)胞骨架的相關(guān)改變，以及益氣活血法延緩衰老及血管老化的研究現(xiàn)狀，印證了細(xì)胞骨架的改變會(huì)影響血管的結(jié)構(gòu)和功能，進(jìn)而出現(xiàn)相應(yīng)的血管病變。
　　2、實(shí)驗(yàn)研究:
　　目的:觀察衰

3、老過(guò)程中頸動(dòng)脈和心臟形態(tài)和細(xì)胞骨架的改變，進(jìn)一步探討血管老化的機(jī)制和益氣活血中藥人參三七川芎提取物的干預(yù)作用。
　　方法:建立自然衰老大鼠模型，分為衰老模型組、人參三七川芎醇提取物低、中、高劑量組和白藜蘆醇組，另設(shè)青年對(duì)照組。中藥高、中、低劑量組浸膏劑量分別為2.32g/kg/d、1.16g/kg/d、0.58g/kg/d，白藜蘆醇組劑量為0.05g/kg/d，衰老模型組和青年對(duì)照組給予相應(yīng)體積的蒸餾水。灌胃給藥，每日1次，干預(yù)3

4、個(gè)月。進(jìn)行曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)，觀察老年大鼠存行為學(xué)方面的改變。取材，測(cè)定胸腺和脾臟系數(shù);β-gal染色確定頸動(dòng)脈和心臟衰老的程度;HE染色觀察頸動(dòng)脈和心臟的形態(tài);Masson染色觀察頸動(dòng)脈膠原纖維的分布情況;檢測(cè)血清ROS，MMP-2，MMP-9含量;分別用免疫熒光和免疫組化法觀察頸動(dòng)脈和心肌骨架蛋白α-tubulin，β-tubulin和F-actin的改變;用Western-b lot檢測(cè)頸動(dòng)脈、心肌α-tubulin，β-tubulin,F

5、-actin，HSP27的蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果:與青年組相比，衰老大鼠毛發(fā)蓬松枯槁、無(wú)光澤，易脫落，色發(fā)黃，行動(dòng)遲緩，精神萎靡;跨格總數(shù)均減少(P＜0.01)，總行徑距離減少(P＜0.05)。胸腺系數(shù)和脾臟系數(shù)下降（均P＜0.01）;頸動(dòng)脈和心臟β-gal陽(yáng)性表達(dá)區(qū)域增多;光鏡下可見(jiàn)大鼠頸動(dòng)脈血管壁增厚，內(nèi)膜不光滑且內(nèi)皮細(xì)胞排列紊亂，平滑肌細(xì)胞排列紊亂，彈力膜扭曲、斷裂、結(jié)構(gòu)不完整，外膜結(jié)締組織增生明顯。血管壁膠原面積比值增大

6、(P＜0.01);衰老大鼠心肌增厚，肌纖維排列紊亂，甚至出現(xiàn)心肌纖維溶解斷裂現(xiàn)象;衰老模型組血清ROS、MMP-2、MMP-9含量增高(P＜0.05);頸動(dòng)脈和心肌組織中α-butulin、β-tubulin、F-actin平均熒光強(qiáng)度和平均光密度值分別增加(P＜0.01);α-tubulin，β-tubulin，F(xiàn)-actin蛋白相對(duì)表達(dá)值增加(P＜0.01)，HSP27蛋白相對(duì)表達(dá)值減小(P＜0.01)。與衰老模型組相比，人參三七川

7、芎提取物和白藜蘆醇可以改善衰老大鼠的一般狀態(tài);增加衰老大鼠的跨格總數(shù)和總行徑距離（P＜0.05）;中藥中、高劑量組和白藜蘆醇組可以增高大鼠的胸腺系數(shù)(均P＜0.05)，中藥高劑量組和白藜蘆醇組可以增高大鼠的脾臟系數(shù)(P＜0.01);降低頸動(dòng)脈和心臟β-gal陽(yáng)性表達(dá)區(qū)域，改善頸動(dòng)脈和心臟重構(gòu)現(xiàn)象，降低血管壁膠原面積比值(P＜0.05)，降低血清ROS、MMP-2含量(P＜0.05);中藥中、高劑量組和白藜蘆醇組血清的MMP-9降低(P＜

8、0.05）;中藥各劑量組和白藜蘆醇組的頸動(dòng)脈和心肌中α-butulin、β-tubulin、F-actin平均熒光強(qiáng)度和平均光密度值分別減少(P＜0.05);α-tubulin、β-tubulin、F-actin蛋白表達(dá)相對(duì)值減少(P＜0.05)，HSP27蛋白表達(dá)相對(duì)值增加(P＜0.01)。
　　結(jié)論:1、隨著增齡，大鼠在行為學(xué)、免疫功能、氧化應(yīng)激和細(xì)胞外基質(zhì)等方面發(fā)生改變，表現(xiàn)為跨格總數(shù)和行徑總距離的減少，胸腺系數(shù)和脾臟系數(shù)的

9、下降，血清ROS和基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2、MMP-9含量增高。2、隨著增齡，大鼠頸動(dòng)脈和心臟發(fā)生形態(tài)的改變，表現(xiàn)為血管壁增厚，心肌細(xì)胞肥大等血管和心肌重構(gòu)現(xiàn)象，此外，血管壁膠原分布面積增加。3、隨著增齡，大鼠頸動(dòng)脈和心臟的細(xì)胞骨架蛋白發(fā)生改變，表現(xiàn)為α-butulin、β-tubulin、F-actin含量升高，上游調(diào)控蛋白HSP27含量降低。4、人參三七川芎提取物和白藜蘆醇能夠提高衰老大鼠的行為學(xué)能力和免疫功能，改善血管和心肌重構(gòu)現(xiàn)