法舒地爾對血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)足細胞骨架重構(gòu)的干預(yù)作用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  觀察ROCK抑制劑法舒地爾對血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)誘導(dǎo)小鼠足細胞骨架重構(gòu)的影響,并進一步探討法舒地爾在血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)足細胞骨架重構(gòu)病變中的保護機制。
  方法:
  免疫細胞化學(xué)染色鑒定SV40T轉(zhuǎn)染的條件永生型小鼠足細胞株。將不同濃度(10-9-10-6 mol/L)AngⅡ處理足細胞24h、10-7mol/L AngⅡ以不同時間(6-36h)作用足細胞,觀察足細胞Synap

2、topodin表達的變化。本實驗體外采用10-7mol/L AngⅡ作用足細胞24h致骨架重構(gòu)的損傷模型。實驗分為3組:對照組、AngⅡ刺激組、法舒地爾干預(yù)組。對照組:用RPMI1640培養(yǎng)液培養(yǎng)足細胞;AngⅡ刺激組:采用10-7mol/L AngⅡ干預(yù)足細胞24h;法舒地爾干預(yù)組:10-6mol/L mol/L法舒地爾預(yù)孵育不同時間和不同濃度(10-8-10-6 mol/L)法舒地爾預(yù)孵育30 min后,再加入含10-7 mol/L

3、 AngⅡ的培養(yǎng)基,繼續(xù)孵育24h。FITC-鬼筆環(huán)肽熒光染色分析足細胞骨架相關(guān)蛋白F-actin結(jié)構(gòu)分布變化;Western Blot檢測足細胞骨架相關(guān)蛋白Synaptopodin表達變化。進一步觀察細胞內(nèi)調(diào)節(jié)骨架裝配的Rho/ROCK信號通路的活性,即采用Western Blot檢測Rho激酶I(ROCKI)及磷酸化肌球蛋白磷酸酯酶靶點亞單位1(MYPT1)表達,代表ROCK的表達及活性。
  結(jié)果:
  AngⅡ以劑量

4、依賴和時間依賴方式下調(diào)足細胞骨架相關(guān)蛋白Synaptopodin的表達。AngⅡ使足細胞骨架相關(guān)蛋白F-actin結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,F(xiàn)-actin由交聯(lián)高度有序地平行聚集成束貫穿于細胞全長,沿細胞呈極性分布解體以松散的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)互相結(jié)合,足細胞失去原有的細胞張力。而法舒地爾預(yù)處理可減輕AngⅡ介導(dǎo)的Synaptopodin的表達下調(diào)(P<0.05),法舒地爾預(yù)處理可減輕F-actin的重構(gòu)。法舒地爾預(yù)處理可下調(diào) AngⅡ誘導(dǎo)的足細胞Rho激酶

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