法舒地爾對VEGF誘導(dǎo)的大鼠肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖的抑制作用研究.pdf

1、目的:肺動脈平滑肌細(xì)胞(PASMCs)的過度增殖在肺動脈高壓(PAH)的形成過程中起著關(guān)鍵作用,抑制PASMC的增殖被證明對PAH的患者是有益的。最近的研究表明,Rho／ROCK對于平滑肌細(xì)胞的增殖是很關(guān)鍵的。然而,Rho／ROCK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)及其下游信號仍不完全清楚。本課題研究了法舒地爾鹽酸水合物,一種Rho激酶的抑制劑,對大鼠PASMC增殖的抑制作用及其與Rho／ROCK信號通路的關(guān)系。
　　 方法:選用成年清潔級SD大鼠,腹腔

2、注射戊巴比妥鈉麻醉后,無菌條件下分離肺動脈,去除肺動脈內(nèi)皮后,用眼科剪將肺動脈中膜剪成約1mm×1mm×1mm的組織塊,以每平方厘米1塊的密度接種于50ml培養(yǎng)瓶中,常規(guī)培養(yǎng),以免疫組化法進(jìn)行細(xì)胞鑒定。采用生長良好的3～5代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。采用MTT法檢測細(xì)胞增殖；采用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期；采用RT-PCR分析ROCK-1 mRNA。
　　 結(jié)果:MTT法結(jié)果顯示,法舒地爾有效的抑制了血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)誘導(dǎo)的PASMC

3、增殖,且這種抑制程度呈現(xiàn)劑量依賴性。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,10ng／ml的VEGF刺激24h后,處于S期的細(xì)胞百分?jǐn)?shù)顯著地從17.8％增加到26.3％,同時(shí),G1期細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)從75.3％降到54％。這些效應(yīng)可以被法舒地爾的預(yù)處理所抑制。法舒地爾(10,30,50,100μmol／L)顯著地阻滯了VEGF誘導(dǎo)的細(xì)胞周期的進(jìn)程,使進(jìn)入S期的PASMCs的細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)分別下降到15.2％,11.1％,12.7％和10.9％,而停滯在G0／G1