茶黃素中壓色譜制備及對(duì)大鼠平滑肌細(xì)胞的炎癥抑制作用.pdf

1、茶黃素是紅茶中的重要品質(zhì)成分，也是飲茶有益健康的重要活性成分，具有明顯的抗氧化、清除自由基、殺菌抑菌、抗過敏、防止動(dòng)脈粥樣化、抗輻射等生物學(xué)功效。由于茶黃素單體分離存在一定的難度，在一定程度上限制了茶黃素生物學(xué)活性的研究，因此尋找一種簡單易行、高效低成本的茶黃素單體制備方法，并挖掘茶黃素新的生物學(xué)活性是當(dāng)前業(yè)界的研究重點(diǎn)之一。
　　本文在前期研究基礎(chǔ)上，以茶多酚為原料，應(yīng)用體外模擬氧化體系制備高茶黃素含量的茶色素；并進(jìn)一步應(yīng)用中壓

2、制備色譜制得三種主要茶黃素單體；應(yīng)用AngII誘導(dǎo)的大鼠血管平滑肌細(xì)胞炎癥模型，研究了三種茶黃素單體對(duì)血管炎癥的影響，以期為茶黃素單體的抗炎研究提供理論參考。論文取得的主要結(jié)果如下：
　　1．以茶多酚為原料，鮮葉中粗酶液為催化劑，雙液相酶促氧化制得高茶黃素（49.9％）含量的茶色素。
　　2．以上述自制茶色素為原料，以反相C18為柱填料，使用MPLC色譜對(duì)茶黃素進(jìn)行分離純化，用一步分離得到茶黃素（TF1）、茶黃素-3-單沒食

3、子酸酯（TF2a）和茶黃素雙沒食子酸酯（TF3）三種茶黃素單體，純度分別為94.6%、97.1%和95.6%。三種單體總得率達(dá)34.0%，總回收率66.8%。
　　3．應(yīng)用AngII誘導(dǎo)的大鼠血管平滑肌細(xì)胞（VSMC）炎癥模型，通過RT-PCR檢測促炎細(xì)胞因子mRNA的表達(dá)，以EGCG為對(duì)照，研究了茶黃素對(duì)炎癥的影響。發(fā)現(xiàn)EGCG（40μM）、TF1（40μM、100μM）、TF3（100μM）均可顯著下調(diào)由AngII誘導(dǎo)的促炎因

4、子IL-6 mRNA的表達(dá)，抑制率分別達(dá)到44.3%、22.7%、51.4%、38.4%。
　　4．采用DHE染色法檢測原位活性氧（ROS）的產(chǎn)生，結(jié)果表明：EGCG（40μM）、TF1（100μM）、TF3（100μM）均可降低由AngII刺激產(chǎn)生的大鼠血管平滑肌細(xì)胞中ROS水平。表明EGCG、TF1、TF3可能通過抑制ROS的增加，達(dá)到抵抗AngII引起的大鼠VSMC細(xì)胞炎癥作用。
　　5．在上述炎癥模型中，進(jìn)一步通過W

5、estern blotting檢測與炎癥相關(guān)信號(hào)蛋白p-IKK、p-p38/MAPK和TLR4蛋白的表達(dá)差異，初步探討了茶黃素抑制AngII誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞炎癥的作用機(jī)制。發(fā)現(xiàn)EGCG（40μM）和不同濃度TF1（40μM、100μM）、TF3（40μM、100μM）干預(yù)后的p38/MAPK蛋白磷酸化沒有顯著變化；但EGCG（40μM）、TF1（100μM）和TF3（40μM、100μM）可使IKK蛋白的磷酸化表達(dá)分別降低了58.4