Transgelin基因在肺腺癌發(fā)展中的作用研究.pdf

1、背景和目的：
　　肺癌是全球最常見的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅人類健康和生命。由于其起病隱匿，多數(shù)患者就診時已屬中晚期，僅能進(jìn)行姑息治療，預(yù)后較差，生存時間很短，總的5年生存率約10％-15％。因此迫切需要尋求新的早期診斷標(biāo)志物和有效的治療方法。近年來，國內(nèi)外許多專家學(xué)者從基因水平探索肺癌發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制，從而對相關(guān)基因及其表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行干預(yù)將有可能為肺癌的診治開辟一個新的領(lǐng)域。
　　轉(zhuǎn)膠蛋白(Transgelin)是肌動蛋白結(jié)合

2、蛋白，屬于鈣調(diào)節(jié)蛋白家族成員之一。一些研究表明，在肺癌、結(jié)直腸癌、肝癌及前列腺癌等惡性腫瘤中，均發(fā)現(xiàn)transgelin基因的表達(dá)上調(diào)，提示transgelin可能有促進(jìn)這些腫瘤生長的作用，
　　本課題組的前期研究發(fā)現(xiàn)，transgelin的表達(dá)水平在人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞中表達(dá)升高，提示transgelin在肺癌的發(fā)生發(fā)展中可能起了重要作用。本研究以慢病毒為載體，干擾transgelin在人肺腺癌細(xì)胞A549中的表達(dá)，建立trans

3、gelin穩(wěn)定沉默的細(xì)胞株，觀察其在裸鼠肺腺癌皮下移植瘤的生長情況，探討transgelin在肺腺癌細(xì)胞中的體內(nèi)生物學(xué)效應(yīng)。同時應(yīng)用組織芯片和免疫組化相結(jié)合方法進(jìn)一步檢測transgelin在肺腺癌組織、癌旁組織中的表達(dá)情況，同時分析transgelin的表達(dá)與肺腺癌臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征的相關(guān)性。因此，干擾transgelin基因的表達(dá)可望成為肺癌治療的一個有效靶點。
　　方法：
　　構(gòu)建Transgelin

4、shRNA慢病毒載體，將其轉(zhuǎn)染入人肺腺癌A549細(xì)胞中，并采用Real-Time PCR、 Western blot法檢測轉(zhuǎn)染前后trangelin表達(dá)變化。成功建立皮下移植瘤模型18只，按皮下注射細(xì)胞不同分為3組:(1)慢病毒轉(zhuǎn)染transgelin shRNA的A549細(xì)胞（實驗組）(2)慢病毒轉(zhuǎn)染無關(guān)序列的A549細(xì)胞（陰性載體對照組）(3)未轉(zhuǎn)染任何載體的A549細(xì)胞（空白對照組）。每5天測量腫瘤大小，第30天處死所有裸鼠，計算

5、腫瘤體積，治療前后裸鼠體重變化及抑瘤率。留取組織標(biāo)本，免疫組化法檢測transgelin和增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)蛋白在皮下移植瘤組織中的表達(dá)情況。將具備完成臨床資料的75例肺腺癌的癌組織標(biāo)本及相應(yīng)的癌旁組織制成150點組織芯片，應(yīng)用免疫組化方法檢測transgelin在肺腺癌組織、癌旁組織中的表達(dá)情況，同時分析transgelin的表達(dá)與肺腺癌臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理特征的相關(guān)性。
　　結(jié)果：
　　(1)三組裸鼠皮

6、下均出現(xiàn)皮下移植瘤，成瘤率為100％。與陰性載體對照組和空白對照組相比，實驗組裸鼠皮下移植瘤瘤體積生長速度明顯緩慢，體積顯著小，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，體積抑瘤率達(dá)69.2％。與陰性載體對照組和空白對照組相比，實驗組腫瘤重量明顯減輕，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，瘤重抑瘤率達(dá)75％。
　　(2)實驗組transgelin蛋白表達(dá)水平明顯低于陰性載體對照組及空白對照組，模型構(gòu)建成功。同時PCNA蛋白水平顯著低于陰性載體

7、對照組及空白對照組。
　　(3)免疫組化結(jié)果顯示癌組織中transgelin蛋白陽性表達(dá)率68％(51/75)，高于癌旁組織中表達(dá)的40％(30/75)(p=0.001，x2=11.836)。
　　(4) Transgelin的表達(dá)在(Ⅰ+Ⅱ)期與(Ⅲ+Ⅳ)期間的表達(dá)差別有統(tǒng)計學(xué)意義(x2=6.117，p＜0.023);在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組間的表達(dá)差別有統(tǒng)計學(xué)意義(x2=5.672，p＜0.025);在（高+中）

8、分化組與低分化組間的表達(dá)差別有統(tǒng)計學(xué)意義(x2=6.63，p＜0.014); Transgelin蛋白的高表達(dá)與性別、年齡、腫瘤大小無關(guān)（p值均＞0.05）。
　　結(jié)論:：
　　利用慢病毒transgelin shRNA載體干擾transgelin基因表達(dá)能有效抑制人肺腺癌A549在裸鼠腫瘤體積的生長，其中可能的一種機(jī)制是抑制PCNA蛋白表達(dá)，即抑制裸鼠體內(nèi)細(xì)胞的增殖有關(guān)。同時肺腺癌組織中transgelin蛋白表達(dá)水平明顯