驅(qū)鉛扶正方對(duì)鉛誘導(dǎo)的PC-12細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的:本實(shí)驗(yàn)采用醋酸鉛溶液誘導(dǎo)建立PC-12細(xì)胞鉛中毒的模型，觀察不同濃度醋酸鉛對(duì)具有神經(jīng)元特性的PC-12細(xì)胞的影響，和鉛中毒神經(jīng)系統(tǒng)損傷進(jìn)展中凋亡相關(guān)蛋白的變化，以及驅(qū)鉛扶正方對(duì)其干預(yù)效應(yīng)，以探討驅(qū)鉛扶正方防治鉛中毒神經(jīng)系統(tǒng)損傷的作用機(jī)制。
　　方法:將PC-12細(xì)胞設(shè)置空白組、醋酸鉛染毒組、含藥血清組、陰性對(duì)照組和陽性對(duì)照組。不同濃度醋酸鉛溶液刺激PC-12細(xì)胞，通過MTT法檢測(cè)醋酸鉛染毒組細(xì)胞生存率。含藥血清濃度為10％、

2、采血時(shí)間為2h的驅(qū)鉛扶正方含藥血清干預(yù)醋酸鉛誘導(dǎo)的PC-12細(xì)胞，通過MTT法檢測(cè)含藥血清組和陽性對(duì)照組細(xì)胞生存率，免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)其細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)，免疫印跡技術(shù)檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白caspase-3、Bax和抑制凋亡蛋白Bcl-2、survivin的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:1.醋酸鉛溶液對(duì)PC-12細(xì)胞生存率的影響;醋酸鉛濃度越高PC-12細(xì)胞生存率越低，細(xì)胞在100μl濃度為100μmol/L醋酸鉛刺激24 h后，醋酸鉛染毒

3、組細(xì)胞PC-12細(xì)胞生存率接近50％(46.7％)。2.驅(qū)鉛扶正方含藥血清對(duì)PC-12細(xì)胞的作用;驅(qū)鉛扶正方含藥血清在濃度為10％時(shí)，并且于末次給藥后2h采血，使染鉛PC-12細(xì)胞增殖最為明顯。3.與凋亡相關(guān)的蛋白在染鉛細(xì)胞中的表達(dá);醋酸鉛染毒組凋亡蛋白caspase-3在細(xì)胞外基質(zhì)明顯表達(dá)。含藥血清組抑制凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)明顯。陽性對(duì)照組細(xì)胞凋亡蛋白在細(xì)胞外基質(zhì)均有不同程度的表達(dá)，但抑制凋亡Bcl-2表達(dá)不明顯。4.細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋

4、白表達(dá)與神經(jīng)系統(tǒng)損傷的關(guān)系;醋酸鉛染毒組Bcl-2、survivin蛋白表達(dá)明顯(△p＜0.01);陽性對(duì)照組與醋酸鉛染毒組比較caspase-3、Bcl-2、Bax、survivin蛋白表達(dá)均有顯著的升高(*p＜0.01);含藥血清組與醋酸鉛染毒組比較，caspase-3和Bax蛋白表達(dá)顯著下降，Bcl-2和survivin蛋白表達(dá)顯著升高(p＜0.01)，含藥血清組較陽性對(duì)照組caspase-3和Bax蛋白表達(dá)顯著下降，Bcl-2蛋