丹參酮ⅡA聯(lián)合異基因臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞治療大鼠肝硬化的研究.pdf

1、目的:觀察異基因人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(Umbilcal cord mesenchymal stem cells，UCMSCs)移植后肝硬化大鼠的生物安全性;研究中藥丹參酮ⅡA聯(lián)合異基因UCMSCs移植治療大鼠肝硬化的效果，以及不同移植途徑對(duì)療效的影響。
　　方法:四氯化碳法制備肝硬化大鼠模型。造模成功后，將肝硬化大鼠隨機(jī)分為5組，每組15只。分別設(shè)為:對(duì)照組，肝動(dòng)脈介入組，腹腔注射組，尾靜脈移植組，丹參酮ⅡA聯(lián)合尾靜脈移植組。嚴(yán)格按

2、操作流程制備UCMSCs懸液，以細(xì)胞膜紅色熒光探針DiI標(biāo)記。每組UCMSCs懸液約含2×107個(gè)細(xì)胞，終體積為0.2 ml。對(duì)照組經(jīng)尾靜脈注入同體積醫(yī)用生理鹽水(0.9％NS)。丹參酮ⅡA聯(lián)合尾靜脈移植組，于移植當(dāng)日開(kāi)始，經(jīng)腹腔注入20 mg/kg丹參酮ⅡA，連續(xù)7d。記錄UCMSCs移植后各組大鼠的進(jìn)食、飲水、排便及活動(dòng)等情況。分別于移植后1d、3d、1m及3m處死大鼠，取肝組織，制備冰凍切片，熒光顯微鏡下觀察UCMSCs的肝內(nèi)定植

3、情況。檢測(cè)大鼠靜脈血中白蛋白及谷丙轉(zhuǎn)氨酶的水平。RT-PCR及Western blotting分析大鼠肝組織中人源性白蛋白、細(xì)胞角蛋白18的表達(dá)量。
　　結(jié)果:異基因UCMSCs移植后的各組大鼠進(jìn)食、飲水、排便及活動(dòng)與移植前相比均無(wú)明顯異常，各組大鼠均無(wú)異常死亡。與模型組比較，經(jīng)尾靜脈注射、肝動(dòng)脈介入、腹腔注射及UCMSCs聯(lián)合丹參酮Ⅱ治療后，各組大鼠肝組織內(nèi)均發(fā)現(xiàn)UCMSCs的定植，血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶均降低，而白蛋白明顯升高(P＜0

4、.05)。RT-PCR及Western blotting結(jié)果顯示，UCMSCs移植后，各組大鼠肝組織均表達(dá)人源性細(xì)胞角蛋白18和白蛋白，其中丹參酮ⅡA聯(lián)合UCMSCs治療組的表達(dá)量明顯高于尾靜脈移植組(P＜0.05)。三種不同移植途徑，即尾靜脈注射、肝動(dòng)脈介入及腹腔注射，對(duì)大鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶及白蛋白的表達(dá)無(wú)明顯影響(P＞0.05)，三組大鼠肝組織中人源性細(xì)胞角蛋白18和白蛋白的表達(dá)水平也無(wú)明顯差異（P＞0.05）。
　　結(jié)論:人臍

5、帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植后能在肝硬化大鼠的肝內(nèi)定植，并具有向肝細(xì)胞樣細(xì)胞分化的能力，從而改善肝硬化大鼠的肝臟功能;丹參酮ⅡA聯(lián)合UCMSCs移植可在一定程度上增強(qiáng)移植治療的效果。尾靜脈注射、肝動(dòng)脈介入及腹腔注射三種不同移植途徑對(duì)肝硬化的治療效果無(wú)明顯影響。說(shuō)明異基因的人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療肝硬化是安全和有效的。該課題提示，臨床上使用干細(xì)胞移植治療肝臟疾病時(shí)，可選擇易于操作且創(chuàng)傷小的外周靜脈作為肝臟接受干細(xì)胞移植治療的首選方法，聯(lián)合使用中藥