臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞聯(lián)合神經(jīng)導(dǎo)管治療大鼠股神經(jīng)缺損的研究.pdf

1、目的:探討將臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(HUMSCs)應(yīng)用于去細(xì)胞神經(jīng)導(dǎo)管來(lái)修復(fù)大鼠8mm股骨神經(jīng)缺損的治療效果，為HUMSCs修復(fù)周?chē)窠?jīng)損傷的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:采用組織塊與胰酶消化法從人臍帶中分離、純化和傳代培養(yǎng)HUMSCs，倒置相差顯微鏡觀察HUMSCs的形態(tài)及生長(zhǎng)情況，制作第3代HUMSCs生長(zhǎng)曲線、流式細(xì)胞儀分析及向神經(jīng)誘導(dǎo)分化，并行熒光免疫化學(xué)檢測(cè)。其次運(yùn)用化學(xué)萃取法獲得去細(xì)胞神經(jīng)。選用SD大鼠共60只，將其隨機(jī)

2、分為3組，每組20只。A組:股骨神經(jīng)切下8mm口后再縫合;B組:HUMSCs種植于神經(jīng)導(dǎo)管中修復(fù)8mm股骨神經(jīng)缺損;C組:神經(jīng)導(dǎo)管+生理鹽水。8周后，行大體行為學(xué)觀察（BBB評(píng)分），電生理檢測(cè)，逆行示蹤標(biāo)記觀察及計(jì)數(shù)，免疫組化。
　　結(jié)果:使用上述倆種方法均可獲得HUMSCs，倒置相差顯微鏡下細(xì)胞均為貼壁生長(zhǎng)，形態(tài)為成纖維細(xì)胞樣。但通過(guò)生長(zhǎng)曲線發(fā)現(xiàn)組織塊法培養(yǎng)的細(xì)胞活性更好，流式鑒定表達(dá)CD29，CD44，CD105，不表達(dá)CD3

3、4，CD45，誘導(dǎo)后，Nestin、GFAP及NF-M表達(dá)陽(yáng)性。術(shù)后8周檢查結(jié)果顯示，A組、B組及C組的BBB評(píng)分、電生理及NF-200染色后神經(jīng)微絲的長(zhǎng)度均存在明顯差異，但對(duì)于逆行示蹤標(biāo)記，各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物損傷一側(cè)與健側(cè)所對(duì)應(yīng)的脊髓前角染紅色神經(jīng)元數(shù)量之比均未見(jiàn)明顯差異。
　　結(jié)論:
　　1.人臍帶中含有間充質(zhì)干細(xì)胞，對(duì)于原代培養(yǎng)組織塊法要優(yōu)于胰酶冷消化法;并且HUMSCs有向神經(jīng)元方向誘導(dǎo)的能力。
　　2.HUMSCs