人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞聯(lián)合微創(chuàng)血腫抽吸術(shù)治療大鼠腦出血的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景：
　　腦出血是指原發(fā)性非外傷性腦實(shí)質(zhì)出血，也稱自發(fā)性腦出血，是臨床上常見的血管性疾病，發(fā)病率、死亡率和致殘率均較高。除了血腫的占位效應(yīng)及對(duì)周圍組織的直接破壞之外，繼發(fā)性腦損傷也是出血后腦損傷的主要原因，包括出血后血腫擴(kuò)大壓迫腦組織，引起腦組織移位和損傷，繼發(fā)性炎性反應(yīng)，產(chǎn)生的凝血素引起的凝血連鎖反應(yīng)，紅細(xì)胞溶解產(chǎn)生的血紅蛋白所誘導(dǎo)的毒性反應(yīng)，補(bǔ)體級(jí)聯(lián)反應(yīng)以及神經(jīng)元凋亡等方面。因此，腦出血的及時(shí)治療十分關(guān)鍵。微創(chuàng)血腫抽吸術(shù)

2、一直是腦出血治療的研究熱點(diǎn)，近年來有關(guān)干細(xì)胞移植治療腦出血的實(shí)驗(yàn)研究表明，干細(xì)胞進(jìn)入大鼠腦組織中，替代了神經(jīng)元的功能，減輕腦出血后的炎性反應(yīng)，并促進(jìn)神經(jīng)功能的恢復(fù)，此方法可能會(huì)成為臨床治療腦出血的新方法。目前，仍未見臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(HUC-MSCs)移植聯(lián)合微創(chuàng)血腫抽吸術(shù)治療腦出血的實(shí)驗(yàn)研究。本實(shí)驗(yàn)觀察了HUC-MSCs移植聯(lián)合微創(chuàng)血腫抽吸術(shù)對(duì)大鼠腦出血的療效，旨在為臨床進(jìn)一步應(yīng)用干細(xì)胞移植治療腦出血提供臨床實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　研究

3、目的：
　　本實(shí)驗(yàn)在建立大鼠腦出血模型的基礎(chǔ)上，探討HUC-MSCs移植聯(lián)合微創(chuàng)血腫抽吸術(shù)治療大鼠腦出血后腦內(nèi)P53的表達(dá)及神經(jīng)功能的恢復(fù)。
　　研究方法：
　　體外分離培養(yǎng)HUC-MSCs，移植前以BrdU標(biāo)記，采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色方法鑒定HUC-MSCs。將造模成功的120只SD大鼠隨機(jī)分為腦出血組、血腫抽吸組、細(xì)胞移植組、細(xì)胞移植聯(lián)合血腫抽吸組（聯(lián)合治療組），各組又分為1、3、7、14和30d5個(gè)時(shí)間點(diǎn)。向尾狀核

4、注入2μLⅣ型膠原酶建立腦出血模型，6h后將符合標(biāo)準(zhǔn)的模型，進(jìn)行相應(yīng)的處理后，各組分別于各時(shí)間點(diǎn)處死大鼠前，用改良的大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分(mNSS)評(píng)價(jià)大鼠的神經(jīng)功能狀況，后采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)大鼠腦出血周圍P53基因的表達(dá)及HUC-MSCs在腦組織的分布，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
　　研究結(jié)果：
　　1.HUC-MSCs細(xì)胞中CD29表達(dá)陽性，細(xì)胞漿為棕褐色;CD34表達(dá)陰性，細(xì)胞漿為藍(lán)色;CD44表達(dá)陽性，細(xì)胞膜為棕褐色;

5、CD90表達(dá)陽性，細(xì)胞漿為棕褐色;CD105表達(dá)陽性，細(xì)胞漿為棕褐色。腦出血組和血腫抽吸組未發(fā)現(xiàn)BrdU表達(dá)的陽性細(xì)胞，細(xì)胞移植組和聯(lián)合治療組則于出血腦區(qū)、海馬及大腦皮質(zhì)等部位發(fā)現(xiàn)較多的陽性細(xì)胞。P53在血腫側(cè)腦組織的胞核內(nèi)廣泛表達(dá)，集中在血腫周圍紋狀體區(qū)、皮質(zhì)、皮質(zhì)下及海馬區(qū)等部位。2.與腦出血組比較，血腫抽吸組、細(xì)胞移植組和聯(lián)合治療組的mNSS評(píng)分、P53表達(dá)量均下降(P＜0.05)，并且7d時(shí)，聯(lián)合治療組的mNSS評(píng)分及P53表達(dá)