丙泊酚后處理對腦缺血再灌注損傷大鼠海馬抑制性GABA能中間神經(jīng)元K+–Cl-共轉(zhuǎn)運(yùn)體-2表達(dá)的影響.pdf

1、目的：圍手術(shù)期腦血管意外的發(fā)生率逐年增高，尤其是老年（>65歲）以及行大手術(shù)（如心臟和大血管手術(shù)、大關(guān)節(jié)置換術(shù)以及長時(shí)間的腹部外科手術(shù)等）的病人。經(jīng)過統(tǒng)計(jì)研究發(fā)現(xiàn)，非心血管手術(shù)患者圍手術(shù)期急性缺血性卒中（Acute ischemic stroke, AIS）的發(fā)生率，部分結(jié)腸切除術(shù)為0.7％、全髖關(guān)節(jié)置換術(shù)為0.2%以及肺葉切除術(shù)為0.6%，而對于年齡大于65歲的患者，AIS的發(fā)病率更高，部分結(jié)腸切除術(shù)1.0%、全髖關(guān)節(jié)置換術(shù)0.3%以

2、及肺葉切除術(shù)0.8%。并且行心臟和大血管手術(shù)的患者 AIS的發(fā)生率更高。麻醉醫(yī)生要慎重選擇麻醉藥。丙泊酚是臨床上最為常用的靜脈全身麻醉藥。本課題組前期研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，大鼠腦缺血再灌注損傷后，丙泊酚后處理能夠激活磷脂酰肌醇3激酶/絲氨酸-蘇氨酸激酶（phosphoinositide-3-kinase, PI3K），從而上調(diào)α-氨基-3-羥基-5-甲基-4-異惡唑-丙酸（α-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazo

3、lepropionic acid, AMPA）受體的GluR2亞基在細(xì)胞膜表達(dá)，并發(fā)揮腦保護(hù)作用。γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid, GABA）及其受體是中樞神經(jīng)系統(tǒng)主要的抑制性遞質(zhì)系統(tǒng)。研究發(fā)現(xiàn)，在腦缺血再灌注損傷中興奮性遞質(zhì)及其受體系統(tǒng)過度激活和/或以及抑制性遞質(zhì)及其受體系統(tǒng)過度抑制導(dǎo)致的“興奮性毒性”，是引發(fā)腦損傷最主要的機(jī)制。K+–Cl-共轉(zhuǎn)運(yùn)體2（K+-Cl--co-transporter2, KCC2）作

4、為神經(jīng)元突觸后膜上的氯離子轉(zhuǎn)出體，其主要功能是把神經(jīng)元內(nèi)的Cl-轉(zhuǎn)運(yùn)到突觸間隙，維持突觸間隙高[Cl-]，而突觸間隙高[Cl-]是 GABA受體產(chǎn)生抑制性突觸后電位（inhibitory postsynaptic potentials, IPSP）的物質(zhì)基礎(chǔ)。本研究擬研究丙泊酚后處理對腦缺血再灌注損傷大鼠海馬GABA能抑制性中間神經(jīng)元KCC2表達(dá)的影響。
　　方法：健康雄性Sprague Dawley（SD）大鼠228只，7-8周

5、齡，體重260-280g，隨機(jī)分為6組（n=38）：假手術(shù)組（Sham組）、缺血再灌注組（I/R組）、缺血再灌注+丙泊酚后處理組（Pro組）、KCC2抑制劑DIOA+假手術(shù)組（DIOA+Sham組）、KCC2抑制劑DIOA+缺血再灌注組（DIOAI+I/R組）、DIOA+丙泊酚后處理組（DIOA+Pro組）。應(yīng)用抑制劑組于缺血前15min靜脈注射DIOA30μg。采用 Longa等介紹的MCAO方法制作大鼠右側(cè)大腦中動(dòng)脈栓塞模型，持續(xù)栓

6、塞60min后行再灌注。Pro和 DIOA+Pro組大鼠于再灌注即刻通過輸注泵以20mg·kg-1·h-1的速度經(jīng)股靜脈恒速泵入濃度為1%的丙泊酚，持續(xù)輸注2h。再灌注后24h進(jìn)行改良神經(jīng)行為學(xué)評分（modified neurological severity score,mNSS）及腦梗死體積測定；再灌注后24h，取腦片進(jìn)行尼氏染色觀察手術(shù)側(cè)海馬 CA1區(qū)存活神經(jīng)元數(shù)量；再灌注后24h，取大腦通過高爾基染色觀察手術(shù)側(cè)海馬CA1區(qū)神經(jīng)元

7、樹突棘數(shù)量；再灌注后24h取腦片免疫熒光染色觀察缺血側(cè)海馬 CA1區(qū)KCC2與谷氨酸脫羧酶67（glutamic acid decarboxylase67, GAD67）共表達(dá)情況；再灌注后24h，取缺血側(cè)海馬，通過Western Blot法檢測KCC2在缺血側(cè)海馬細(xì)胞的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：缺血再灌注損傷后24 h，在mNSS評分、腦梗死體積和樹突棘密度上，Pro組較I/R組均明顯降低，而Pro組存活神經(jīng)元數(shù)量較I/R組明顯增多

8、，上述結(jié)果表明丙泊酚后處理對腦缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用。同時(shí)后處理還可使缺血側(cè)海馬抑制性中間神經(jīng)元KCC2表達(dá)上調(diào)（均P<0.05）。與Pro組相比， DIOA+Pro組mNSS評分、腦梗死體積和樹突棘密度均成升高趨勢，而缺血側(cè)海馬存活神經(jīng)元數(shù)量和抑制性中間神經(jīng)元 KCC2表達(dá)均明顯降低（P<0.01或P<0.05），即KCC2抑制劑DIOA部分阻斷丙泊酚后處理急性腦保護(hù)作用。
　　結(jié)論：丙泊酚后處理（20mg·kg-1·h-1