人源性肝癌組織凍存復(fù)蘇皮下移植模型的初步建立.pdf

1、研究目的：
　　將手術(shù)切除的新鮮人肝癌組織凍存復(fù)蘇后移植于免疫缺陷裸鼠皮下以建立人源性肝癌組織凍存復(fù)蘇皮下移植模型并初步評(píng)估其應(yīng)用價(jià)值。
　　材料與方法：
　　取5例原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者手術(shù)切除的新鮮肝癌組織，分別標(biāo)記為HCC01，HCC02，HCC03，HCC04，HCC05。腫塊離體30min內(nèi)完成家屬標(biāo)本過目和病理科取材后，各例肝癌組織用Hanks平衡液沖洗后按照不同凍存時(shí)間分別隨機(jī)分為A組(7d),B組(30d)

2、,C組(90d),D組(180d)四組。放入凍存管中標(biāo)記凍存時(shí)間，液氮中保存?zhèn)溆糜诟伟﹥龃鎻?fù)蘇皮下移植模型的建立。按照各例肝癌組織凍存時(shí)間分組將凍存的人肝癌組織復(fù)蘇后移植于裸鼠皮下以建立人源性肝癌組織凍存復(fù)蘇皮下移植模型。5例原代人肝癌組織和各組皮下移植瘤常規(guī)浸泡于福爾馬林、中性甲醛溶液中固定，進(jìn)行石蠟包埋切片、HE染色用于病理學(xué)形態(tài)觀察，免疫組化測(cè)定肝細(xì)胞抗原(Hep Par1)、甲胎蛋白（α-fetoprotein，AFP）、CD3

3、4的表達(dá)。觀察記錄A組(7d),B組(30d),C組(90d),D組(180d)復(fù)蘇后裸鼠皮下移植的成瘤率、生長速度、瘤體體積，通過對(duì)比各組皮下移植瘤的大體觀形態(tài)、鏡下病理組織特點(diǎn)、免疫組化Hep Par1、AFP、CD34的表達(dá)，以及對(duì)比同種肝癌組織各組皮下移植瘤與原代肝癌的微血管密度(microvasculardecompression,MVD)計(jì)數(shù)對(duì)人源性肝癌組織凍存復(fù)蘇皮下移植瘤模型進(jìn)行初步的評(píng)價(jià)。
　　結(jié)果：
　　

4、5例手術(shù)切除的原發(fā)性肝癌組織，術(shù)后經(jīng)病理確診為原發(fā)性肝細(xì)胞癌。各例肝癌的A組(7d)，B組（30d），C組（90d），D組(180d)凍存的肝癌組織經(jīng)復(fù)蘇后共移植至60只雄性裸鼠皮下，其中51只可見肉眼皮下成瘤，總成瘤率達(dá)85.0％。4組瘤體生長速度基本相同（P=0.954>0.05），最終成瘤體積A組（867.24±29.81），B組（889.30±13.88），C組（862.10±29.41），D組（856.30±25.25）均無明

5、顯差異，但D組（180d）較A組（7d）裸鼠皮下瘤體的生長潛伏期長。人源性肝癌組織凍存復(fù)蘇皮下移植瘤體在裸鼠體內(nèi)可以保持穩(wěn)定生長，未出現(xiàn)成瘤后自行消退。4組肝癌凍存復(fù)蘇裸鼠皮下移植瘤 HE染色均示腫瘤呈癌巢狀分布、核質(zhì)比例失調(diào)，細(xì)胞核明顯異形改變，免疫組化染色HepPar1、AFP、CD34呈陽性，微血管密度較原代肝癌組織無差異。各組移植瘤鏡下病理組織形態(tài)、免疫組化結(jié)果均能與人肝癌組織生物學(xué)特性保持一致。
　　結(jié)論：
　　成