人源性肝癌組織凍存復蘇皮下移植模型的初步建立.pdf

1、研究目的：
　　將手術(shù)切除的新鮮人肝癌組織凍存復蘇后移植于免疫缺陷裸鼠皮下以建立人源性肝癌組織凍存復蘇皮下移植模型并初步評估其應用價值。
　　材料與方法：
　　取5例原發(fā)性肝細胞癌患者手術(shù)切除的新鮮肝癌組織，分別標記為HCC01，HCC02，HCC03，HCC04，HCC05。腫塊離體30min內(nèi)完成家屬標本過目和病理科取材后，各例肝癌組織用Hanks平衡液沖洗后按照不同凍存時間分別隨機分為A組(7d),B組(30d)

2、,C組(90d),D組(180d)四組。放入凍存管中標記凍存時間，液氮中保存?zhèn)溆糜诟伟﹥龃鎻吞K皮下移植模型的建立。按照各例肝癌組織凍存時間分組將凍存的人肝癌組織復蘇后移植于裸鼠皮下以建立人源性肝癌組織凍存復蘇皮下移植模型。5例原代人肝癌組織和各組皮下移植瘤常規(guī)浸泡于福爾馬林、中性甲醛溶液中固定，進行石蠟包埋切片、HE染色用于病理學形態(tài)觀察，免疫組化測定肝細胞抗原(Hep Par1)、甲胎蛋白（α-fetoprotein，AFP）、CD3

3、4的表達。觀察記錄A組(7d),B組(30d),C組(90d),D組(180d)復蘇后裸鼠皮下移植的成瘤率、生長速度、瘤體體積，通過對比各組皮下移植瘤的大體觀形態(tài)、鏡下病理組織特點、免疫組化Hep Par1、AFP、CD34的表達，以及對比同種肝癌組織各組皮下移植瘤與原代肝癌的微血管密度(microvasculardecompression,MVD)計數(shù)對人源性肝癌組織凍存復蘇皮下移植瘤模型進行初步的評價。
　　結(jié)果：
　　

4、5例手術(shù)切除的原發(fā)性肝癌組織，術(shù)后經(jīng)病理確診為原發(fā)性肝細胞癌。各例肝癌的A組(7d)，B組（30d），C組（90d），D組(180d)凍存的肝癌組織經(jīng)復蘇后共移植至60只雄性裸鼠皮下，其中51只可見肉眼皮下成瘤，總成瘤率達85.0％。4組瘤體生長速度基本相同（P=0.954>0.05），最終成瘤體積A組（867.24±29.81），B組（889.30±13.88），C組（862.10±29.41），D組（856.30±25.25）均無明

5、顯差異，但D組（180d）較A組（7d）裸鼠皮下瘤體的生長潛伏期長。人源性肝癌組織凍存復蘇皮下移植瘤體在裸鼠體內(nèi)可以保持穩(wěn)定生長，未出現(xiàn)成瘤后自行消退。4組肝癌凍存復蘇裸鼠皮下移植瘤 HE染色均示腫瘤呈癌巢狀分布、核質(zhì)比例失調(diào)，細胞核明顯異形改變，免疫組化染色HepPar1、AFP、CD34呈陽性，微血管密度較原代肝癌組織無差異。各組移植瘤鏡下病理組織形態(tài)、免疫組化結(jié)果均能與人肝癌組織生物學特性保持一致。
　　結(jié)論：
　　成