診斷超聲聯(lián)合微泡對(duì)大鼠皮下移植肝癌血管通透性影響及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景:
　　原發(fā)性肝癌是目前臨床最常見的惡性腫瘤之一,具有惡化速度快、復(fù)發(fā)率高、治療效果差、生存時(shí)間短等特點(diǎn),居目前全球腫瘤相關(guān)死亡第三位,在我國(guó)腫瘤相關(guān)死亡中居第二位,因此,其治療問題尤顯重要?；熓悄壳案伟┚C合治療中最常用的方法,其效果取決于藥物在腫瘤局部的濃度與作用時(shí)間,系統(tǒng)化療時(shí)因?yàn)榫奂谀[瘤局部的藥物濃度低,而全身血液循環(huán)中藥物濃度相對(duì)較高,易引起全身嚴(yán)重的毒副作用。因此,發(fā)展一種既達(dá)到最佳抗腫瘤效果又不致引起全身嚴(yán)重毒

2、副作用的方法是臨床腫瘤治療的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。
　　國(guó)內(nèi)外研究均表明超聲靶向破壞微泡是一種能夠有效、無創(chuàng)的提高藥物或基因滲入腫瘤組織的新型物理治療技術(shù)。該方法通過注射一定劑量的超聲微泡,并給予一定功率的超聲輻照使微泡發(fā)生破裂,通過產(chǎn)生的空化效應(yīng)、聲孔效應(yīng)等導(dǎo)致微血管及細(xì)胞膜通透性升高,以提高抗腫瘤藥物的生物利用度。目前,文獻(xiàn)報(bào)道中多使用高強(qiáng)度的聚焦超聲治療儀介導(dǎo)微泡破壞進(jìn)行相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究,可明顯提高藥物或基因的生物利用度。
　　使

3、用超聲治療儀器不僅缺乏相關(guān)的圖像引導(dǎo)系統(tǒng),而且對(duì)深部腫瘤組織缺乏足夠的穿透力。因此,對(duì)于較大范圍的治療靶區(qū),我們不妨采用更普及、更簡(jiǎn)便的診斷超聲作為工具,通過超聲輻照腫瘤區(qū)域破壞微泡來提高靶區(qū)微血管及腫瘤細(xì)胞膜的通透性,介導(dǎo)藥物的傳輸。相關(guān)文獻(xiàn)也證實(shí)了此設(shè)想的可行性,但關(guān)于該技術(shù)有效實(shí)驗(yàn)參數(shù)不一致,針對(duì)其具體機(jī)制的研究較少,因此我們?cè)O(shè)計(jì)了本課題研究。
　　目的:
　　1.探討高機(jī)械指數(shù)診斷超聲聯(lián)合微泡對(duì)大鼠皮下移植性肝癌血管

4、通透性的影響,使用定性和定量方法進(jìn)行評(píng)估,證明該技術(shù)方法的有效性;
　　2.探索不同機(jī)械指數(shù)、不同超聲輻照時(shí)間以及不同微泡劑量對(duì)診斷超聲聯(lián)合微泡條件下提高腫瘤血管通透性的影響,優(yōu)化此技術(shù)應(yīng)用的參數(shù);
　　3.初步探討診斷超聲聯(lián)合微泡技術(shù)引起腫瘤血管通透性改變的細(xì)胞及分子生物學(xué)水平的機(jī)理。
　　方法:
　　1.以伊文氏藍(lán)作為判斷血管通透性改變的指示劑,將已建立皮下移植肝癌模型成功的SD大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、單純微

5、泡組、單純?cè)\斷超聲輻照組、診斷超聲聯(lián)合微泡組共四組進(jìn)行實(shí)驗(yàn),通過定性和定量的方法檢測(cè)診斷超聲聯(lián)合微泡條件下腫瘤血管通透性改變的情況。
　　2.以腫瘤組織中伊文氏藍(lán)含量作為血管通透性改變的指示劑,通過定量的方法檢測(cè)不同機(jī)械指數(shù)、不同超聲輻照時(shí)間以及不同微泡劑量對(duì)診斷超聲聯(lián)合微泡條件下腫瘤血管通透性的改變。
　　3.以能反應(yīng)腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞活化及受損的P-selectin蛋白作為評(píng)價(jià)指標(biāo),分別采用Westernblot及免疫組織

6、化學(xué)的方法對(duì)各處理組腫瘤組織中蛋白表達(dá)水平進(jìn)行定量和定性分析,進(jìn)而判斷診斷超聲聯(lián)合微泡條件下腫瘤血管通透性影響的可能機(jī)制。
　　4.使用透射電鏡觀察腫瘤血管通透性改變發(fā)生的部位,從超微結(jié)構(gòu)了解診斷超聲聯(lián)合微泡條件下腫瘤血管通透性改變的主要機(jī)制。
　　結(jié)果:
　　1.使用伊文氏藍(lán)作為指示劑通過定性和定量的方法檢測(cè)診斷超聲聯(lián)合微泡條件下腫瘤血管通透性改變的情況:診斷超聲聯(lián)合微泡組腫瘤組織中滲出的伊文氏藍(lán)含量明顯高于其余各實(shí)

7、驗(yàn)組,差異有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);
　　2.在一定范圍內(nèi)隨著機(jī)械指數(shù)的升高、超聲輻照時(shí)間的延長(zhǎng)、微泡濃度的增加,腫瘤組織中滲出的伊文氏藍(lán)含量均有明顯增加;
　　3.使用Westernblot及免疫組織化學(xué)的方法對(duì)P-selectin蛋白在各實(shí)驗(yàn)組的表達(dá)情況進(jìn)行定量和定性分析:結(jié)果顯示在超聲聯(lián)合微泡組腫瘤組織蛋白水平在血管壁周圍表達(dá)高于其他各實(shí)驗(yàn)組,提示血管內(nèi)皮細(xì)胞活化或細(xì)胞通透性增加可能是血管通透性增加的因素之一;

8、
　　4.透射電鏡超微結(jié)構(gòu)觀察可見診斷超聲聯(lián)合微泡組腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹明顯,線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等結(jié)構(gòu)水腫,細(xì)胞膜完整性中斷。
　　結(jié)論:
　　1.在一定條件下,診斷超聲聯(lián)合微泡可明顯提高輻照腫瘤組織血管通透性,為提高化療藥物的生物利用度提供了新方法;
　　2.機(jī)械指數(shù)、微泡濃度、超聲輻照時(shí)間均是影響診斷超聲聯(lián)合微泡提高腫瘤血管通透性的主要因素;
　　3.診斷超聲聯(lián)合微泡提高腫瘤血管通透性增加的機(jī)制主要是影響血