酒精聯(lián)合高脂飲食誘導小鼠脂肪肝模型的建立及發(fā)病機制探討.pdf

1、目的:建立一種與人類脂肪肝發(fā)生發(fā)展進程類似的小鼠脂肪肝模型，并借此來探討高脂飲食同時飲酒對肝臟可能的損傷途徑以及脂肪肝與胰島素抵抗之間的關(guān)系，為臨床研究提供實驗依據(jù)。
　　方法:C57BL/6J小鼠120只，SPF級，體重18～22g，雌雄各半，隨機分為兩組:對照組(Con)、模型組(Mod)各60只，雌雄各半。對照組動物自由飲水，給予基礎飼料，熱量組成:碳水化合物71％，脂肪8％，，蛋白質(zhì)21％，總熱量為260kcal/100g

2、;模型組動物自由飲用20％乙醇溶液，飼喂高脂飼料，熱量組成:碳水化合物20％，脂肪59％，蛋白質(zhì)21％，總熱量為540kcal/100g。分別于喂養(yǎng)1周、2周、4周、7周后每組隨機選10只小鼠，雌雄各半，動態(tài)觀察其肝臟形態(tài)學改變，第7周形態(tài)學證據(jù)顯示模型組動物脂肪變性程度達到脂肪肝的標準時，立即將剩余全部小鼠禁食12小時，稱重后從小鼠眶后靜脈叢采血，用于測定空腹血清胰島素及血清ALT、AST、TBA、TG、CHO、TBIL、ALP、GL

3、U、FFA。然后處死小鼠，立刻取出肝臟組織，大體觀察、稱重后迅速分離并截取約合適大小的肝右葉標本放入2.5％戊二醛固定液中固定，4℃保存，用以在透射電鏡下觀察肝臟超微結(jié)構(gòu)的改變;然后將肝中葉新鮮組織用OCT包埋劑包埋，-20℃冰箱保存，用以肝組織切片油紅O染色;肝左葉放入10％中性福爾馬林固定;其余肝組織液氮冷凍后置-80℃超低溫冰箱保存，用于檢測肝組織TG、T-SOD、MDA、ADH、ALDH、T-AOC。
　　結(jié)果:
　

4、　1、在建模第6周和第7周期間，分別各有1只實驗動物死亡。
　　2、肝組織HE染色結(jié)果表明，建模2周后，模型組動物肝細胞開始出現(xiàn)輕度脂肪變，隨著建模時間增長，脂肪變性嚴重程度逐漸加重，7周后部分動物的肝細胞出現(xiàn)彌漫性大泡性肝細胞脂肪變性，脂肪變肝細胞占肝小葉的1/3以上，達到脂肪肝標準;模型組動物肝細胞還可見不同程度的肝細胞壞死現(xiàn)象，對照組動物肝細胞未見明顯脂肪變性。
　　3、肝組織油紅O染色結(jié)果顯示，隨建模時間延長，模型組

5、動物肝細胞胞漿內(nèi)的紅色脂滴逐漸增多，到第7周時，肝細胞漿內(nèi)可見大量紅色脂滴，肝細胞腫大，符合肝細胞內(nèi)脂質(zhì)沉積的特征。對照組動物肝臟中脂滴含量明顯少于模型組。
　　4、建模7周后，與對照組相比，模型組雄性動物體重增加4.20％(P＜0.05)，肝重增加6.36％(P＜0.05)，肝重系數(shù)無明顯增加（無統(tǒng)計學差異）;雌性動物體重增加8.29％(P＜0.01)，肝重增加10.23％(P＜0.01)，肝重系數(shù)增加不明顯（無統(tǒng)計學差異）。<

6、br>　　5、建模7周后，與對照組相比，模型組動物血清ALT水平上升一倍，AST水平上升81％，TBA水平上升108％，TG水平上升57％，CHO水平上升27％（均為P＜0.01）;模型組動物血清TBIL、ALP、GLU、FFA水平與對照組相比無明顯差別。
　　6、建模7周后，與對照組相比，模型組動物肝臟TG上升27％(P＜0.05)，MDA水平上升53％(P＜0.01)，T-AOC下降35％(P＜0.01);模型組動物肝臟ADH

7、、T-SOD、ALDH水平與對照組相比無明顯差別。
　　7、建模7周后，與對照組相比，模型組動物空腹血糖水平略有上升（無統(tǒng)計學差異），空腹胰島素水平和胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)顯著上升（P＜0.01）。
　　8、建模7周后，肝組織電鏡結(jié)果顯示模型組動物肝細胞胞漿疏松;細胞核邊緣不規(guī)則、不清晰，核仁不明顯，電子密度降低;線粒體腫脹，嵴粒模糊不清;粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯擴張，出現(xiàn)斷裂;胞漿內(nèi)可見到大小不一的脂肪滴沉積。
　　

8、結(jié)論:
　　1、采用酒精聯(lián)合高脂飲食的方法建立C57BL/6J小鼠脂肪肝模型，建模7周后，測得模型組實驗動物體重與肝重相對于對照組動物均有明顯增加;動物肝臟HE染色和油紅O染色觀察結(jié)果表明模型組小鼠肝臟的脂肪變性程度已達到脂肪肝的標準。
　　2、采用酒精聯(lián)合高脂飲食的方法建立C57BL/6J小鼠脂肪肝模型，建模7周后，血清ALT、AST、TBA、TG、CHO水平均明顯升高;肝臟TG水平明顯升高。血清和肝臟生化數(shù)據(jù)變化趨勢與脂

9、肪肝的臨床數(shù)據(jù)改變相一致，模型建立成功。
　　3、采用酒精聯(lián)合高脂飲食的方法建立C57BL/6J小鼠脂肪肝模型，建模7周后，肝臟MDA水平明顯升高，T-AOC明顯下降，T-SOD也有下降趨勢，說明在本實驗中氧化應激和脂質(zhì)過氧化反應有可能參與了脂肪肝的形成。
　　4、采用酒精聯(lián)合高脂飲食的方法建立C57BL/6J小鼠脂肪肝模型，建模7周后，空腹血糖水平略有上升，空腹胰島素水平上升兩倍，經(jīng)計算得出模型組動物胰島素抵抗指數(shù)明顯高于