酒精聯(lián)合高脂飲食誘導(dǎo)小鼠脂肪肝模型的建立及發(fā)病機(jī)制探討.pdf

1、目的:建立一種與人類脂肪肝發(fā)生發(fā)展進(jìn)程類似的小鼠脂肪肝模型，并借此來探討高脂飲食同時(shí)飲酒對(duì)肝臟可能的損傷途徑以及脂肪肝與胰島素抵抗之間的關(guān)系，為臨床研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:C57BL/6J小鼠120只，SPF級(jí)，體重18～22g，雌雄各半，隨機(jī)分為兩組:對(duì)照組(Con)、模型組(Mod)各60只，雌雄各半。對(duì)照組動(dòng)物自由飲水，給予基礎(chǔ)飼料，熱量組成:碳水化合物71％，脂肪8％，，蛋白質(zhì)21％，總熱量為260kcal/100g

2、;模型組動(dòng)物自由飲用20％乙醇溶液，飼喂高脂飼料，熱量組成:碳水化合物20％，脂肪59％，蛋白質(zhì)21％，總熱量為540kcal/100g。分別于喂養(yǎng)1周、2周、4周、7周后每組隨機(jī)選10只小鼠，雌雄各半，動(dòng)態(tài)觀察其肝臟形態(tài)學(xué)改變，第7周形態(tài)學(xué)證據(jù)顯示模型組動(dòng)物脂肪變性程度達(dá)到脂肪肝的標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，立即將剩余全部小鼠禁食12小時(shí)，稱重后從小鼠眶后靜脈叢采血，用于測(cè)定空腹血清胰島素及血清ALT、AST、TBA、TG、CHO、TBIL、ALP、GL

3、U、FFA。然后處死小鼠，立刻取出肝臟組織，大體觀察、稱重后迅速分離并截取約合適大小的肝右葉標(biāo)本放入2.5％戊二醛固定液中固定，4℃保存，用以在透射電鏡下觀察肝臟超微結(jié)構(gòu)的改變;然后將肝中葉新鮮組織用OCT包埋劑包埋，-20℃冰箱保存，用以肝組織切片油紅O染色;肝左葉放入10％中性福爾馬林固定;其余肝組織液氮冷凍后置-80℃超低溫冰箱保存，用于檢測(cè)肝組織TG、T-SOD、MDA、ADH、ALDH、T-AOC。
　　結(jié)果:
　

4、　1、在建模第6周和第7周期間，分別各有1只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死亡。
　　2、肝組織HE染色結(jié)果表明，建模2周后，模型組動(dòng)物肝細(xì)胞開始出現(xiàn)輕度脂肪變，隨著建模時(shí)間增長(zhǎng)，脂肪變性嚴(yán)重程度逐漸加重，7周后部分動(dòng)物的肝細(xì)胞出現(xiàn)彌漫性大泡性肝細(xì)胞脂肪變性，脂肪變肝細(xì)胞占肝小葉的1/3以上，達(dá)到脂肪肝標(biāo)準(zhǔn);模型組動(dòng)物肝細(xì)胞還可見不同程度的肝細(xì)胞壞死現(xiàn)象，對(duì)照組動(dòng)物肝細(xì)胞未見明顯脂肪變性。
　　3、肝組織油紅O染色結(jié)果顯示，隨建模時(shí)間延長(zhǎng)，模型組

5、動(dòng)物肝細(xì)胞胞漿內(nèi)的紅色脂滴逐漸增多，到第7周時(shí)，肝細(xì)胞漿內(nèi)可見大量紅色脂滴，肝細(xì)胞腫大，符合肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積的特征。對(duì)照組動(dòng)物肝臟中脂滴含量明顯少于模型組。
　　4、建模7周后，與對(duì)照組相比，模型組雄性動(dòng)物體重增加4.20％(P＜0.05)，肝重增加6.36％(P＜0.05)，肝重系數(shù)無明顯增加（無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異）;雌性動(dòng)物體重增加8.29％(P＜0.01)，肝重增加10.23％(P＜0.01)，肝重系數(shù)增加不明顯（無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異）。<

6、br>　　5、建模7周后，與對(duì)照組相比，模型組動(dòng)物血清ALT水平上升一倍，AST水平上升81％，TBA水平上升108％，TG水平上升57％，CHO水平上升27％（均為P＜0.01）;模型組動(dòng)物血清TBIL、ALP、GLU、FFA水平與對(duì)照組相比無明顯差別。
　　6、建模7周后，與對(duì)照組相比，模型組動(dòng)物肝臟TG上升27％(P＜0.05)，MDA水平上升53％(P＜0.01)，T-AOC下降35％(P＜0.01);模型組動(dòng)物肝臟ADH

7、、T-SOD、ALDH水平與對(duì)照組相比無明顯差別。
　　7、建模7周后，與對(duì)照組相比，模型組動(dòng)物空腹血糖水平略有上升（無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異），空腹胰島素水平和胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR)顯著上升（P＜0.01）。
　　8、建模7周后，肝組織電鏡結(jié)果顯示模型組動(dòng)物肝細(xì)胞胞漿疏松;細(xì)胞核邊緣不規(guī)則、不清晰，核仁不明顯，電子密度降低;線粒體腫脹，嵴粒模糊不清;粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯擴(kuò)張，出現(xiàn)斷裂;胞漿內(nèi)可見到大小不一的脂肪滴沉積。
　　

8、結(jié)論:
　　1、采用酒精聯(lián)合高脂飲食的方法建立C57BL/6J小鼠脂肪肝模型，建模7周后，測(cè)得模型組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重與肝重相對(duì)于對(duì)照組動(dòng)物均有明顯增加;動(dòng)物肝臟HE染色和油紅O染色觀察結(jié)果表明模型組小鼠肝臟的脂肪變性程度已達(dá)到脂肪肝的標(biāo)準(zhǔn)。
　　2、采用酒精聯(lián)合高脂飲食的方法建立C57BL/6J小鼠脂肪肝模型，建模7周后，血清ALT、AST、TBA、TG、CHO水平均明顯升高;肝臟TG水平明顯升高。血清和肝臟生化數(shù)據(jù)變化趨勢(shì)與脂

9、肪肝的臨床數(shù)據(jù)改變相一致，模型建立成功。
　　3、采用酒精聯(lián)合高脂飲食的方法建立C57BL/6J小鼠脂肪肝模型，建模7周后，肝臟MDA水平明顯升高，T-AOC明顯下降，T-SOD也有下降趨勢(shì)，說明在本實(shí)驗(yàn)中氧化應(yīng)激和脂質(zhì)過氧化反應(yīng)有可能參與了脂肪肝的形成。
　　4、采用酒精聯(lián)合高脂飲食的方法建立C57BL/6J小鼠脂肪肝模型，建模7周后，空腹血糖水平略有上升，空腹胰島素水平上升兩倍，經(jīng)計(jì)算得出模型組動(dòng)物胰島素抵抗指數(shù)明顯高于