體外酒精性脂肪肝模型的建立和評價.pdf

1、隨著人民生活水平的提高，過量飲酒引起的肝臟損傷日益增多，已經(jīng)成為影響公眾健康的問題。盡管對酒精性脂肪肝（簡稱酒精肝）的損傷機理，包括脂肪肝誘因和形成過程等，已有較為全面的認識，然而，目前尚無有效控制和治療酒精肝的方法。其原因在于，缺少合適的酒精肝模型，因此難以篩選和找到有效的防治手段。目前酒精肝模型以動物為主，建立模型一般需要八周時間，高成本和低效率限制了其應(yīng)用。而體外酒精肝模型則可以在短時間（1-2天）內(nèi)建立，具有成本低、適合快速篩選

2、治療藥物的優(yōu)勢。但是，傳統(tǒng)的體外酒精肝模型采用單層貼壁肝細胞培養(yǎng)方式，并以高濃度的乙醇進行短時間刺激，該方法大大偏離了體內(nèi)乙醇慢性肝損傷的情況，不能模擬體內(nèi)酒精肝的發(fā)生過程。本文針對傳統(tǒng)體外模型的缺點，采用能長期維持肝功能的凝膠包埋培養(yǎng)肝細胞，通過條件優(yōu)化和體內(nèi)外比較驗證該模型的可靠性，并用于篩選抗酒精肝的中藥有效成分，為尋找有效的酒精肝治療藥物奠定基礎(chǔ)。
　　 論文分為三部分。第一部分為酒精肝模型的建立，考察了不同細胞培養(yǎng)方式

3、、培養(yǎng)基和乙醇濃度對模型的影響，并采用針形電極在線檢測了有無Parafilm M封口膜密封的培養(yǎng)皿中乙醇揮發(fā)速率差異。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，肝細胞在Parafilm M封口膜密封的培養(yǎng)皿內(nèi)以Williams' medium E培養(yǎng)基和凝膠包埋培養(yǎng)的方式并經(jīng)過48h的200mM乙醇作用，可以反映乙醇導(dǎo)致的體內(nèi)肝細胞損傷。
　　 第二部分對該模型進行了詳細評價，分析了包括脂質(zhì)積累、過氧化壓力和CYP2E1誘導(dǎo)等各項指標。研究表明，經(jīng)過乙醇處理后

4、，體外模型的損傷指標呈現(xiàn)與體內(nèi)酒精肝一致的變化趨勢，說明該模型可以表征體內(nèi)酒精肝的情況。然后，使用針形電極對肝灌流中的乙醇濃度變化（表征體內(nèi)肝臟中乙醇濃度）進行了檢測，初步嘗試關(guān)聯(lián)體內(nèi)外模型的乙醇濃度，進一步驗證了體外模型的可靠性。
　　 第三部分采用已建立的模型進行保肝藥物篩選，找到了一種有效抗酒精肝的中藥有效成分——納米水飛薊賓。
　　 總之，本文建立的體外酒精肝模型，可用于抗酒精肝藥物篩選，尤其在利用我國豐富中藥資