酶聯(lián)免疫吸附法和免疫印跡法檢測(cè)抗核小體抗體的方法學(xué)比較.pdf

1、目的：
　　系統(tǒng)性紅斑狼瘡( Systemic Lupus Erythematosus, SLE)是一種以出現(xiàn)多種自身抗體伴多系統(tǒng)損害為特征的自身免疫性疾病( Autoimmune disese, AID)。目前臨床診斷SLE的自身抗體主要有抗核抗體( Antinuclear antibodies, ANA)、抗雙鏈DNA抗體( Anti-double stranded DNA, ds-DNA)、抗Sm抗體、抗組蛋白抗體( Ant

2、i-histone antibody，Anti-His)、抗核小體抗體( Anti-nucleosome antibody, AnuA)等多種自身抗體。核小體是組成真核生物染色質(zhì)的基本單位，其核心是由DNA和四對(duì)組織蛋白組成的復(fù)合物，AnuA是以核小體為靶抗原，由活化的B細(xì)胞產(chǎn)生的自身抗體，在SLE的診斷中有重要意義。目前實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)AnuA的方法主要有免疫印跡法（Western blotting，WB）和酶聯(lián)免疫吸附法（enzyme-l

3、inked immunosorbent assay，ELISA）。WB是依據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測(cè)樣品中蛋白質(zhì)的方法，此法是在凝膠電泳和固相免疫測(cè)定技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新的免疫生化技術(shù)，用于體外定性檢測(cè)血清或血漿中的人抗核小體的IgG類抗體，操作比較簡(jiǎn)便；而ELISA是指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯丙烯等固相載體上，利用抗原抗體結(jié)合專一性進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法。因?yàn)椴煌臋z測(cè)方法會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果有差異，為客觀評(píng)價(jià)

4、ELISA和WB兩種實(shí)驗(yàn)方法的性能，本研究分別應(yīng)用此兩種方法檢測(cè)抗核小體抗體，比較其差異并結(jié)合臨床診斷對(duì)兩種方法進(jìn)行對(duì)比分析，為臨床工作尋找合適的檢測(cè)方法。
　　方法：
　　收集鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院2013年3月-2013年9月患者血清818例，男性182例，女性636例，年齡在8歲–80歲,平均（42.4±17.3）歲。按照臨床診斷將病例分為SLE組與非SLE組，SLE組360例，非SLE組458例。SLE的診斷依據(jù)200

5、9年系統(tǒng)性紅斑狼瘡國際臨床協(xié)作組( systemic lupus international collaborating clinics, SLICC)在美國風(fēng)濕病學(xué)學(xué)會(huì)( American College of Rheumatology, ACR)1997年SLE分類標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上新的修訂標(biāo)準(zhǔn)，非SLE的各類疾病均符合相應(yīng)的國際分類診斷標(biāo)準(zhǔn)。
　　采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。ELISA與WB檢測(cè)AnuA的陽性率比

6、較采用卡方檢驗(yàn)，2種方法診斷SLE的準(zhǔn)確度比較采用卡方檢驗(yàn)，敏感性和特異性比較采用ROC曲線分析，曲線下面積比較采用Z檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1．陽性率方面，ELISA與WB檢測(cè)AnuA的陽性率分別為35.1％和31.1%，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05)。
　　2．準(zhǔn)確度方面，以SLE的臨床診斷為金標(biāo)準(zhǔn)，ELISA與WB檢測(cè)結(jié)果診斷SLE的準(zhǔn)確性分別為84.7%和83.1%，差異無

7、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　3．敏感度和特異度方面，ELISA檢測(cè)AnuA的敏感度為72.5%，特異度為93.2%；WB檢測(cè)AnuA的敏感度為66.1%，特異度為96.5%。ELISA與WB檢測(cè)AnuA的ROC曲線下面積分別為0.840和0.813，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05)。
　　結(jié)論：
　　ELISA與WB檢測(cè)AnuA的總一致率高，對(duì)SLE診斷的準(zhǔn)確度較高，敏感度和特異度均較好。應(yīng)用WB進(jìn)行AnuA檢測(cè)