基于微孔板核酸雜交酶聯(lián)免疫吸附法檢測DNA結(jié)合蛋白.pdf

1、轉(zhuǎn)錄因子,也被稱為序列特異性DNA結(jié)合蛋白,含有一個(gè)或多個(gè)DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域(DBDs)。它們定位于細(xì)胞質(zhì)中,在正常細(xì)胞功能狀態(tài)下或受到特定因子誘導(dǎo)后,從細(xì)胞質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞核,與基因組中的順式作用元件諸如啟動子、增強(qiáng)子、衰減子等發(fā)生特異性識別結(jié)合,組成基因轉(zhuǎn)錄機(jī)器,進(jìn)而實(shí)現(xiàn)其調(diào)控基因表達(dá)的功能。因此,檢測分析轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)及活化程度對我們了解細(xì)胞功能具有至關(guān)重要的作用。目前常用的檢測技術(shù)主要建立在DNA和蛋白質(zhì)相互作用這一層次,即運(yùn)用含有順式

2、作用元件的DNA為探針,來分析轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合活性。本課題“基于微孔板核酸雜交酶聯(lián)免疫吸附法檢測DNA結(jié)合蛋白”技術(shù)巧妙的利用在高嚴(yán)謹(jǐn)度洗脫條件下轉(zhuǎn)錄因子蛋白對與之特異性結(jié)合的雙鏈核酸序列的保護(hù)作用,將對轉(zhuǎn)錄因子的檢測轉(zhuǎn)換為對相應(yīng)的特異核酸序列的檢測。該方法不需要復(fù)雜的儀器、繁瑣的操作步驟和特異性抗體就可以對轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)及活化程度進(jìn)行定量研究,而且可在較短時(shí)間內(nèi)完成對轉(zhuǎn)錄因子的檢測。我們以檢測轉(zhuǎn)錄因子c-Jun的活性為模型來對該檢

3、測方法進(jìn)行評價(jià),在較短的時(shí)間內(nèi)該方法可以準(zhǔn)確的檢測到3.5ng的轉(zhuǎn)錄因子c-Jun純蛋白和0.625ug的Hela細(xì)胞核粗提取物,具有較高的靈敏度。而且該檢測方法可以用于任何一種轉(zhuǎn)錄因子的檢測。鑒于“基于微孔板核酸雜交酶聯(lián)免疫吸附法”的快速、簡便、高靈敏度和選擇性,該檢測方法可以應(yīng)用到需要對轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合活性進(jìn)行定量,有效,大規(guī)模檢測的領(lǐng)域和科學(xué)研究中,諸如細(xì)胞分子生物學(xué)中對多種處理的刺激應(yīng)答篩選方面,進(jìn)化生物學(xué)研究方面,環(huán)境監(jiān)測