多溴聯(lián)苯醚的酶聯(lián)免疫吸附分析的研究.pdf

1、多溴聯(lián)苯醚是一種被廣泛使用于電子、紡織、建材等工業(yè)領(lǐng)域的溴代阻燃劑，現(xiàn)已被列為新型持久性有機污染物質(zhì)之一。該物質(zhì)性質(zhì)穩(wěn)定難降解且具有很強的親脂疏水性，因此可以在生物體內(nèi)富集并產(chǎn)生積累放大效應(yīng)，并伴隨蒸發(fā)-冷凝等環(huán)境行為遠距離、多介質(zhì)傳輸，因此廣泛存在于空氣、水體、土壤、生物體內(nèi)。多溴聯(lián)苯醚具有多方面的毒性危害，即使是微量存在也會對人體健康及生態(tài)環(huán)境造成不良影響。
　　酶聯(lián)免疫吸附分析(enzyme-linked immunosor

2、bent assay，ELISA)作為一種高效的免疫生物分析技術(shù)，具有靈敏、快速、特異性強等優(yōu)點，尤其是要求對大量環(huán)境樣品的進行初期篩選時很有優(yōu)勢，可大幅度提高監(jiān)測工作效率，同時降低監(jiān)測成本，為儀器檢測提供有效依據(jù)。本文旨在建立一種針對于多溴聯(lián)苯醚的ELISA分析方法，為其快速有效檢測提供理論依據(jù)。
　　首先，本文根據(jù)多溴聯(lián)苯醚(poly brominated diphenyl ethers，PBDEs)中BDE-47為代表研究物

3、質(zhì)，通過改造其分子結(jié)構(gòu)，設(shè)計合成半抗原C15H9Br3O3和C11H13Br2O3N，利用1H核磁共振波譜(1HNMR)和高分辨電子轟擊質(zhì)譜（HREI-MS）進行了結(jié)構(gòu)鑒定，并分別與載體蛋白偶聯(lián)后得到免疫原和包被原。使用免疫原對四只新西蘭大白兔進行7次免疫后取得特異性抗血清。建立ELISA檢測方法，實驗測定半抗原C15H9Br3O3-鎖孔血藍蛋白(K1-KLH)抗體效價為1∶32000，對目標化合物BDE-47的IC50為0.776mg

4、/L，檢出限為0.081mg/L;實驗測定半抗原C15H9Br3O3-牛血清白蛋白(K1-BSA)抗體效價為1∶400000，對目標化合物BDE-47的IC50為0.130mg/L，檢出限為0.01mg/L。
　　其次，為評價所建立的間接競爭抑制ELISA，本文建立傳統(tǒng)氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀器分析方法及商品化ELISA試劑盒檢測作為驗證方法，并分別建立針對BDE-47的儀器檢測和ELISA檢測的環(huán)境樣品前處理方法。分別使用間接競爭抑

5、制ELISA，氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)儀器分析方法及ELISA試劑盒對采集的大沽排污河水樣、底泥及海河常見魚樣處理后進行檢測后對比分析檢驗結(jié)果，三種檢測法均可滿足富集后的環(huán)境樣品的檢測要求。
　　最后，以渤海灣近岸海域為研究區(qū)域，采集水樣、底泥（上層、中層、底層）、魚樣后，采用所建立的ELISA試劑盒分析方法及氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀器分析方法進行檢測，分析PBDEs污染特征。分析結(jié)果表明，水體溶解相及魚體內(nèi)主要以BDE-28，B