特異生境放線菌的選擇分離及新種鑒定.pdf

1、放線菌的次級代謝產物是一類重要的微生物藥物資源。近年來,選擇性分離放線菌的方法學研究取得了顯著成績。基因篩選、培養(yǎng)基篩選、原位篩選等成為當今研究的重要方法。雖然這些分離方法出發(fā)點不同,但是它們都為放線菌的新藥發(fā)現(xiàn)提供了寶貴的菌種資源。
　　 本論文以廈門、云南、青海三地的植物根際土壤樣品作為實驗材料,采用了聚乳酸(Pomy(L-lactide))(PLA)-明膠培養(yǎng)基用于稀有放線菌的分離。通過選擇分離能力的比較發(fā)現(xiàn),聚乳酸(PL

2、A)-明膠培養(yǎng)基比腐植酸培養(yǎng)基有更好的選擇分離效果。利用聚乳酸(PLA)-明膠培養(yǎng)基從11份根際土壤中總共分離得到85株放線菌,根據(jù)16S rRNA鑒定獲得除鏈霉菌屬之外的稀有放線菌71株,稀有放線菌占所有分離菌株的83％,分布于8個屬中:馬杜拉放線菌屬(Actinomadura)48株,野野村氏菌屬(Nonomuraea)15株,假諾卡氏菌屬(Pseudonocardia)3株,壤霉菌屬(Agromyces)1株,韓國生工菌屬(Kri

3、bbella)1株,倫茨氏菌屬(Lentzea)1株,鏈孢囊菌屬(Streptosporangium)1株,球孢囊菌屬(Sphaerisporangium)1株。同一批土樣的腐植酸培養(yǎng)基總共分離得到78株放線菌,其中稀有放線菌數(shù)為7株,稀有放線菌數(shù)僅占總菌數(shù)的9％,分布4個屬中。實驗結果表明,聚乳酸(PLA)-明膠培養(yǎng)基是一種分離馬杜拉菌屬等土壤稀有放線菌的良好選擇培養(yǎng)基。
　　 本文還發(fā)明了一種將平板影印技術與PCR擴增技術相

4、結合從土壤中快速獲得具有安莎類抗生素產生潛力的放線菌的方法。根據(jù)安莎類抗生素合成途徑中的3-氨基-5-羥基苯甲酸合酶(AHBAs)基因的保守性,通過放線菌的培養(yǎng)、影印、AHBAs基因的PCR擴增,從33份土樣中獲得8株AHBAs陽性菌株。通過化學檢測方法,Xzqh-8菌株的代謝產物具有同格爾登霉素化合物同樣的顏色反應。平板影印與PCR技術結合的基因篩選,可作為某些特殊代謝特征的放線菌早期鑒別的有效篩選方法。
　　 本論文還對1株

5、韓國生工菌屬(Kribbella)的稀有放線菌進行了形態(tài)特征、培養(yǎng)特征、生理生化特性、化學分類和分子系統(tǒng)學研究。從表型、基因型和系統(tǒng)發(fā)育三個層次比較分析,最終確定實驗菌株的分類地位。菌株XMU198為韓國生工菌屬內的一個新物種,命名為廈門韓國生工菌(Kribbella amoyensis)。該鑒定結果已經在線發(fā)表于國際系統(tǒng)分類學雜志USEM上(International Journal ofSystematic and Evolutio