麥冬多糖對(duì)NOD小鼠頜下腺AQP5的影響及機(jī)理研究.pdf

1、目的:
　　本研究從干燥綜合征(Sjogren's syndrome，SS)發(fā)病機(jī)制入手，通過觀察中藥麥冬的有效成份麥冬多糖對(duì)NOD小鼠頜下腺病理、組織評(píng)分的作用，并從分子生物學(xué)角度觀察麥冬多糖對(duì)SS模型小鼠頜下腺和血清Th1/Th2樣細(xì)胞因子（IFN-γ、IL-10）、頜下腺水通道蛋白-5(AQP5)及血管活性腸肽(VIP)表達(dá)的影響，探索麥冬多糖治療SS的作用機(jī)理及治療靶點(diǎn)。
　　方法:
　　實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇8周齡雌性

2、NOD小鼠45只及同齡C57BL/6小鼠9只，NOD小鼠隨機(jī)分為模型組、羥氯喹組和麥冬多糖小中大劑量組等5組，以C57BL/6小鼠作為正常對(duì)照組，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，麥冬多糖小、中、大劑量組分別予0.025g/kg/d、0.050g/kg/d、0.10g/kg/d麥冬多糖灌胃，羥氯喹組予0.1 g/kg/d羥氯喹灌胃，模型組和正常組生理鹽水灌胃。給藥42天后小鼠眼眶處取血，離心后取小鼠血清，ELISA法檢測(cè)各組小鼠血清中的IFN-γ與IL

3、-10含量，并計(jì)算兩者比值。脫頸椎法處死小鼠，消毒，分離摘除頜下腺，一側(cè)頜下腺切片，HE染色，普通顯微鏡下觀測(cè)，另一側(cè)頜下腺用蛋白免疫印跡法檢測(cè)頜下腺AQP5含量，PCR檢測(cè)IFN-γ、IL-10和VIPmRNA的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1.頜下腺組織形態(tài)變化結(jié)果:模型組頜下腺組織學(xué)評(píng)分顯著高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。麥冬多糖高中低劑量組和羥氯喹組組織學(xué)評(píng)分均顯著低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0

4、.05)。
　　2.血清IFN-γ、IL-10檢測(cè)結(jié)果:模型組與正常組相比血清IFN-γ與IL-10的含量均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與模型組相比，羥氯喹組、麥冬多糖低劑量組血清IFN-γ的含量顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，麥冬多糖高、中劑量組血清IL-10含量顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，羥氯喹組、麥冬多糖高、中劑量組血清IFN-γ/IL-10比值顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05

5、)，而麥冬多糖低劑量組IFN-γ/IL-10比值與模型組比較差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　3.Western blot檢測(cè)頜下腺AQP5含量結(jié)果:模型組與正常組相比頜下腺中AQP5的表達(dá)顯著降低，差異顯著(P＜0.05)，羥氯喹組以及麥冬多糖高中低劑量組頜下腺AQP5的表達(dá)均顯著高于模型組，差異顯著(P＜0.05)。
　　4.PCR檢測(cè)頜下腺VIPmRNA和IFN-γ、 IL-10的表達(dá)結(jié)果:與正常組相比，模型組

6、頜下腺中VIP mRNA的表達(dá)顯著降低，差異顯著(P＜0.05)。麥冬多糖高中低劑量組頜下腺VIP mRNA的表達(dá)均顯著高于模型組，差異顯著(P＜0.05)，而羥氯喹組頜下腺中VIP mRNA的表達(dá)與模型組相比差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。頜下腺中IFN-γ與IL-10 mRNA的表達(dá)與血清中IFN-γ與IL-10的含量變化一致。
　　結(jié)論:
　　1.麥冬多糖能夠提高NOD小鼠頜下腺組織學(xué)評(píng)分，對(duì)小鼠頜下腺淋巴細(xì)胞的浸

7、潤(rùn)有一定的抑制作用，能夠改善頜下腺的病理損害。
　　2.麥冬多糖能夠上調(diào)NOD小鼠頜下腺AQP5的表達(dá)水平及VIP mRNA的基因表達(dá)，促進(jìn)Th2細(xì)胞因子IL-10的表達(dá)，同時(shí)降低IFN-γ和IL-10兩者比值。
　　3.麥冬多糖可能通過降低IFN-γ的表達(dá)、上調(diào)IL-10的表達(dá)，降低IFN-γ和IL-10兩者比值及上調(diào)VIP mRNA的表達(dá)，從而提高頜下腺中AQP5的表達(dá)達(dá)到保護(hù)NOD小鼠頜下腺的作用。羥氯喹也具有保護(hù)NO