進(jìn)展期胃癌患者術(shù)中腹腔脫落細(xì)胞及相關(guān)基因的研究.pdf

1、目的:研究進(jìn)展期胃癌患者手術(shù)過程前、后腹腔灌洗液脫落細(xì)胞及其DNA異倍體的陽性率，探討其與癌胚抗原(CEA)、細(xì)胞角蛋白7(CK7)、基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP7)等相關(guān)基因、臨床病理的關(guān)系以及手術(shù)對(duì)其的影響。
　　方法:選取前瞻性、多中心、開放、隨機(jī)對(duì)照Ⅲ期臨床試驗(yàn)(NCT01516944)中132例直接手術(shù)的進(jìn)展期胃癌患者，所有患者術(shù)前均行全腹平掃+增強(qiáng)CT等影像學(xué)檢查以排除遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，并經(jīng)胃鏡咬檢6～8塊組織，病理診斷為胃腺癌，

2、且均未使用化療或放療。手術(shù)均擬行標(biāo)準(zhǔn)的D2根治術(shù)，如開腹后發(fā)現(xiàn)已有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移則視情況行姑息手術(shù)，手術(shù)全過程采用嚴(yán)格的無瘤操作。手術(shù)開始后探查腹腔，患者頭高腳低位，提起橫結(jié)腸系膜，用生理鹽水300～400ml(37℃)沖洗下腹部及Doglas窩，使用負(fù)壓吸引器直接將灌洗液吸入干凈的標(biāo)本袋中，如有腹水則有直接抽出，收集300ml左右，此為手術(shù)過程前組標(biāo)本;手術(shù)結(jié)束關(guān)腹前使用無菌蒸餾水(37℃)沖洗3次，共約10分鐘左右，負(fù)壓吸盡，再用生理鹽水

3、300～400ml(37℃)沖洗全腹腔，使用新的吸引器吸取灌洗液300ml左右，此為手術(shù)過程后組標(biāo)本，兩次標(biāo)本均行腹腔灌洗液細(xì)胞學(xué)(peritoneallavage cytology，PLC)檢查，并使用Feulgon染色，檢測(cè)其DNA倍體，倍體≥5c為異常，給出四張圖表報(bào)告，第一張圖橫軸為DNA含量，縱軸為細(xì)胞數(shù)量，正常值＜5c。第二張圖橫軸為DNA含量，縱軸為細(xì)胞核面積。第三張圖為DNA含量最高的前20個(gè)DNA倍體數(shù)值和圖像。最后一

4、張為數(shù)值最大的DNA倍體的鏡下圖像。報(bào)告結(jié)果為（陰性）未見DNA倍體異常細(xì)胞;（陽性）可見DNA倍體異常細(xì)胞。同時(shí)檢測(cè)CEA、CK7、MMP7，在玻片上觀察目標(biāo)細(xì)胞（考慮為癌細(xì)胞且需除外炎細(xì)胞、組織細(xì)胞和增生間皮細(xì)胞等）。CEA和MMP7定位于細(xì)胞漿，胞質(zhì)均勻狀著棕黃色判定為陽性，不著色為陰性;CK7定位于細(xì)胞質(zhì)，著色判定為陽性，否則為陰性;所有標(biāo)本均加做WT-1、Calretinin以排除間皮細(xì)胞。分析PLC和DNA異倍體陽性與各臨床

5、病理參數(shù)的關(guān)系以及手術(shù)對(duì)其的影響。
　　結(jié)果:
　　1、目前PLC被認(rèn)為是檢測(cè)腹腔脫落癌細(xì)胞(exfoliated cancer cells，ECC)的金標(biāo)準(zhǔn)，操作方法簡(jiǎn)便，但其敏感性較低。
　　2、132例胃癌患者中手術(shù)過程前組有24例PLC陽性(18.18％)，而異倍體陽性的有35例(26.52％)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.001)，其敏感度為100％，特異度為89.81％。
　　3、手術(shù)過程前組的CEA、C

6、K7、MMP7的陽性率分別為27.27％、24.24％、25％;而手術(shù)過程后的CEA、CK7、MMP7的陽性率分別為15.15％、14.39％、12.88％。PLC陽性與CEA、CK7的陽性率存在差異(P＜0.05)，但DNA異倍體陽性與CEA、CK7、MMP7的陽性率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　4、根治性的R0手術(shù)PLC的陽性率為12.07％，明顯低于根治性的R1或R2或姑息手術(shù)的62.5％(P＜0.05)。
　　

7、5、手術(shù)過程前腹腔灌洗液陽性與腫瘤最長(zhǎng)徑、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、腫瘤分期、手術(shù)根治度有關(guān)(P＜0.05)，與性別、年齡、腫瘤部位、分化程度、Lauren分型、Borrmann分型無關(guān)(P＞0.05)。
　　6、手術(shù)全程采用嚴(yán)格的無瘤操作，經(jīng)過關(guān)腹前大量蒸餾水沖洗后，手術(shù)過程后組的PLC陽性率為9.09％，比術(shù)前的18.18％有了明顯的下降，且兩者之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.004）。24例手術(shù)過程前組PLC陽性的患者，有

8、14例手術(shù)過程后轉(zhuǎn)為陰性;但是，有兩例患者手術(shù)過程前組PLC為陰性（可見異型細(xì)胞，且DNA倍體均＞5c），而手術(shù)過程后變?yōu)榱岁栃裕?例患者手術(shù)過程前的PLC結(jié)果及有可能是假陰性，而術(shù)后的結(jié)果為真陽性;亦有可能是術(shù)中無瘤操作不當(dāng)造成的醫(yī)源性的腫瘤細(xì)胞脫落。
　　結(jié)論:
　　1、PLC法目前仍是診斷ECC的金標(biāo)準(zhǔn)，但是其敏感度較低，陽性率不高，而DNA倍體及CEA、CK7、MMP7等相關(guān)基因的檢測(cè)結(jié)果陽性率比PLC高。