雷帕霉素對老年大鼠缺血性卒中神經(jīng)功能恢復(fù)及神經(jīng)元再生的相關(guān)性研究.pdf

1、目的:
　　對缺血性卒中老年大鼠給予雷帕霉素(rapamycin)治療，觀察腦梗死體積和行為學表現(xiàn)，探討雷帕霉素與老年缺血性卒中神經(jīng)功能恢復(fù)的相關(guān)性;觀察雷帕霉素對缺血性卒中大鼠模型側(cè)腦室室下區(qū)(Subventricularzone，SVZ)神經(jīng)元再生的作用。
　　方法:
　　實驗一:對老年大鼠采用大腦遠端中動脈阻塞術(shù)(distal Middle Cerebralartery occlusion，dMCAO)建立局部腦

2、缺血模型。將大鼠隨機分成兩組:分別注射雷帕霉素(rapamycin)和二甲基亞砜（Dimethyl Sulphoxide，DMSO，DMSO作為雷帕霉素的溶劑，用作對照組），即dMCAO+rapamycin組和dMCAO+DMSO組。術(shù)前3天進行行為學訓練，并分別在術(shù)前、術(shù)后第1天、術(shù)后第3天進行行為學檢測，包括平衡木試驗(Beam balance test)和懸空旋轉(zhuǎn)試驗(Elevated body swingtest，EBST)，觀

3、測結(jié)束后將大鼠處死、取腦。dMCAO+rapamycin組和dMCAO+DMSO組各取3只進行Western蛋白質(zhì)印跡法檢測，其余行腦梗死體積測量。實驗二:取20只青年鼠，其中10只作為非手術(shù)組，隨機分成兩組，分別經(jīng)腹腔注射雷帕霉素(rapamycin組，n=5)和DMSO(DMSO組，n=5)。其余10只進行dMCAO造模后隨機分為兩組，分別經(jīng)腹腔注射雷帕霉素(dMCAO+rapamycin組，n=5)和DMSO（dMCAO+DMSO

4、組，n=5）。每天經(jīng)腹腔注射BrdU一次，連續(xù)注射3天，然后處死、取腦，制備石蠟切片，行免疫熒光檢測觀察BrdU+、DCX+、BrdU+/DCX+數(shù)日。
　　結(jié)果:
　　1.平衡木試驗結(jié)果:在術(shù)后第1天，dMCAO+rapamycin組的評分優(yōu)于dMCAO+DMSO組，存在統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。在術(shù)后第3天，dMCAO+rapamycin組的評分較dMCAO+DMSO組仍然維持優(yōu)勢，差異存在統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。

5、與前期所做的青年鼠平衡木數(shù)據(jù)相比較，可發(fā)現(xiàn)無論是注射DMSO還是接受rapamycin治療，3天后青年鼠組的評分皆優(yōu)于老年鼠組，且存在統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。
　　2.EBST結(jié)果:在術(shù)后第1天，dMCAO+rapamycin組的左偏比例較dMCAO+DMSO組高，存在顯著統(tǒng)計學差異(P＜0.01)。在術(shù)后第3天，dMCAO+rapamycin組左偏比例仍較dMCAO+DMSO組高，差異存在統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。與我們前

6、期青年鼠數(shù)據(jù)相比較，注射3天DMSO后，老年鼠組和青年鼠的左偏比例不存在統(tǒng)計學差異(P＞0.05)，而經(jīng)過3天的rapamycin治療后，青年鼠組的左偏比例高于老年鼠組，且存在統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。
　　3.腦梗死體積測量: dMCAO+rapamyci n組的梗死體積較dMCAO+DMSO組明顯減小，差異存在顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。將老年鼠dMCAO+DMSO組與前期所做的青年鼠dMCAO+DMSO組進行比較，可發(fā)

7、現(xiàn)老年鼠的腦梗死體積較青年鼠的大，存在顯著統(tǒng)計學差異(P＜0.01)。再將老年鼠dMCAO+rapamycin組與前期所做的青年鼠dMCAO+rapamycin組進行比較，發(fā)現(xiàn)老年鼠的腦梗死體積同樣較青年鼠的大，差異存在顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。
　　4.Western蛋白質(zhì)印跡法檢測:發(fā)現(xiàn)dMCAO+rapamycin組的p-p7Os6和p-4E-BP1水平較dMCAO+DMSO組明顯降低，說明mTOR信號通路被雷帕霉素阻

8、斷。
　　5.免疫熒光結(jié)果:經(jīng)過3天的雷帕霉素或DMSO處理后，我們發(fā)現(xiàn)在非手術(shù)組，rapamycin組的BrdU+、DCX+、BrdU+/DCX+數(shù)目較DMSO組減少，存在統(tǒng)計學差異(P＜0.05);在手術(shù)組，dMCAO+rapamycin組的BrdU+、DCX+、BrdU+/DCX+數(shù)目同樣較dMCAO+DMSO組減少，差異存在統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.老年鼠缺血性卒中后給予雷帕霉素可減小腦