姜黃素抗缺血性海馬神經(jīng)元凋亡分子機(jī)制的研究.pdf

1、目的：觀察c-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制劑-姜黃素對大鼠腦缺血再灌注后海馬神經(jīng)元凋亡的影響,闡明該藥抗神經(jīng)元凋亡作用的分子機(jī)制,為該藥臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù). 方法：制作SD大鼠全腦缺血15 min再灌注損傷模型.實(shí)驗(yàn)分為假手術(shù)組(Sham組)、缺血組(I/R組)、姜黃素預(yù)處理組;姜黃素預(yù)處理組分為30、100、300 mg/kg三劑量組(Cur30,Cur100,Cur300),均在缺血前1小時(shí)腹腔給藥.上述實(shí)驗(yàn)

2、組按再灌注2 h、6 h、1 d、3 d、7 d五個(gè)時(shí)間點(diǎn)再分為五個(gè)亞組,每組10只大鼠.分別制備大鼠大腦石蠟標(biāo)本和活組織冰凍標(biāo)本.光鏡觀察HE染色海馬CAl/3區(qū)細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化;免疫組化法檢測海馬CAl/3區(qū)凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bax及p-JNK的表達(dá),TUNEL法檢測海馬凋亡細(xì)胞數(shù);冰凍海馬組織制備海馬勻漿液,檢測Caspase-3酶活性. 結(jié)果：HE染色Sham組海馬各區(qū)錐體細(xì)胞排列整齊,邊界清楚,核膜邊界清晰,核仁深

3、染、清晰.I/R組細(xì)胞輪廓消失,大部分細(xì)胞出現(xiàn)胞漿固縮,核固縮、碎裂.Cur組70﹪細(xì)胞邊界尚清,核形狀尚規(guī)則,核邊界尚清,少數(shù)細(xì)胞出現(xiàn)核染色變深,胞漿部分消失等變性表現(xiàn).與Sham組相比,I/R.組及姜黃素預(yù)處理組海馬CAl和CA3區(qū)Bcl-2和Bax均在缺血再灌注后2 h表達(dá)開始增加,1d達(dá)到高峰后開始回落,至7 d基本正常.Cur30組、Cur100組、Cur300組海馬CAl和CA3區(qū)Bcl-2在再灌注后6 h、1 d、3 d、

4、7 d三點(diǎn)表達(dá)水平均明顯高于I/R組(P<0.05),且在1 d,3 d點(diǎn)表達(dá)水平Cur100組>Cur30組>Cur300組(P<0.05).I/R組再灌注1 d、3 d Bax表達(dá)水平最高,其次為Cur300組、Cur30組,Cur100組表達(dá)水平最低,Sham組弱表達(dá),各組間兩時(shí)間點(diǎn)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05),而再灌注7 d四組的表達(dá)水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05).I/R組及三姜黃素預(yù)處理組海馬CAl和CA3區(qū)p-JNK在再

5、灌注2 h表達(dá)開始增加,1 d達(dá)峰后下降,至7d恢復(fù);I/R組再灌注6h、1d、3d表達(dá)水平明顯高于Cur300組、Cur30組、Cur100組及Sham組(P<0.05),且再灌注6h、1d、3d的表達(dá)水平Cur300組>Cur30組>Cur100組>Sham組(P<0.05).Sham組各時(shí)間點(diǎn)Caspase-3活性無變化(P>0.05),其余各組在再灌注6h活性開始增強(qiáng),1d達(dá)峰并持續(xù)到3d開始下降,7d仍有較弱表達(dá).I/R組再灌

6、注6h、1d、3d各點(diǎn)Caspase-3活性明顯高于Cur300組、Cur30組及Cur100組,且各點(diǎn)活性Cur300組>Cur30組>Cur100組(P<0.05).TUNEL檢測發(fā)現(xiàn)各缺血組凋亡陽性細(xì)胞主要集中在CA1區(qū),再灌注2h有少量出現(xiàn),后逐漸增多至3d達(dá)到高峰,后明顯減少.Cur100組再灌注6h、1d、3d及7d各點(diǎn)凋亡陽性細(xì)胞數(shù)明顯少于其余三缺血組,且Cur30組