海馬神經(jīng)元之間的大分子通訊.pdf

1、目的：利用原子力顯微鏡技術(shù)(AFM)和轉(zhuǎn)基因技術(shù)研究原代培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元表面超微結(jié)構(gòu)、相互間的連接結(jié)構(gòu)及其相關(guān)功能。
　　 材料和方法：取新生12小時(shí)以內(nèi)的C57小乳鼠，在無(wú)菌條件下原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元細(xì)胞。選擇生長(zhǎng)良好的海馬神經(jīng)元用2.5％的戊二醛(生理鹽水配制)固定30min，然后用流動(dòng)三蒸水輕輕沖洗樣品，以去除樣品表面的鹽結(jié)晶。剪掉培養(yǎng)皿的皿壁，用502膠水固定于載玻片上，待其在空氣中自然干燥后，置于AFM的掃描器上，進(jìn)行掃

2、描成像，成像模式為大氣環(huán)境下的接觸模式(Contact Mode)。分別取新生48小時(shí)的轉(zhuǎn)基因RFP C57乳鼠、EGFP C57乳鼠(其腦部特異性轉(zhuǎn)入綠色熒光蛋白和紅色熒光蛋白)各一只，在無(wú)菌條件下原代混合培養(yǎng)海馬神經(jīng)元細(xì)胞。選擇生長(zhǎng)良好的海馬神經(jīng)元在熒光顯微鏡下觀察并拍照。
　　 結(jié)果：本實(shí)驗(yàn)中培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元生長(zhǎng)狀態(tài)良好。(1)利用AFM觀察顯示：正常海馬神經(jīng)元表面光滑，起伏均勻、規(guī)律，神經(jīng)元多為單個(gè)生長(zhǎng)，突起之間交織成網(wǎng)

3、，相互間有突觸形成。同時(shí)，我們還觀察到海馬神經(jīng)元間存在膜性連接以及長(zhǎng)程非突觸性突起連接結(jié)構(gòu)；(2)利用熒光顯微鏡觀察顯示：在共培養(yǎng)的細(xì)胞中，發(fā)現(xiàn)兩個(gè)通過(guò)膜性連接的海馬神經(jīng)元中的一個(gè)細(xì)胞內(nèi)，同時(shí)存在紅色熒光蛋白和綠色熒光蛋白。
　　 結(jié)論：我們?cè)谝酝墓ぷ髦欣肁FM觀察到海馬神經(jīng)元的一些利用其它顯微技術(shù)難以發(fā)現(xiàn)的超微結(jié)構(gòu)，還發(fā)現(xiàn)了一些用突觸結(jié)構(gòu)難以解釋的連接結(jié)構(gòu)，并對(duì)其中之一的膜性連接結(jié)構(gòu)進(jìn)行了初步的研究：(1)再次證明原子力顯