燈盞乙素衍生物DZY-02的吸收、代謝及其制劑研究.pdf

1、目的:燈盞乙素乙酯(DZY-02)為燈盞乙素(DZ)的衍生物，是治療腦缺血的候選創(chuàng)新藥物。藥效學研究表明燈盞乙素乙酯(DZY-02)對改善大腦中動脈栓塞所致的大鼠神經(jīng)癥狀行為和減少大鼠梗塞范圍的強度均大于燈盞乙素(DZ)，具有良好的開發(fā)前景。本論文研究的主要目的，是在課題組前期研究的基礎上，對DZY-02原料藥的有關物質(zhì)及其吸收、代謝進行研究，并以此為基礎開展制劑研究，為DZY-02的藥物開發(fā)奠定基礎和提供數(shù)據(jù)支撐。
　　方法:(

2、1) DZY-02的含量測定及其有關物質(zhì)研究:本文建立了測定DZY-02原料藥主成分及其有關物質(zhì)含量同時測定的HPLC方法，并采用UPLC-MS對其主要有關物質(zhì)進行結構鑒定。(2)DZY-02腸吸收特性研究:采用大鼠在體單向腸灌流模型，HPLC法測定腸灌流液中DZY-02的濃度，分別考察3個劑量組DZY-02在十二指腸、空腸、回腸的吸收情況，以及P-gp和BCRP蛋白抑制劑對DZY-02吸收的影響。(3)DZY-02代謝研究:采用體外肝

3、勻漿溫孵的方法探討了DZY-02的代謝產(chǎn)物及其生物轉(zhuǎn)化途徑，經(jīng)UPLC-MS確定其代謝產(chǎn)物;此外收集了灌胃DZY-02后大鼠的尿液和糞便，對DZY-02原形排泄率進行了計算，并對其體內(nèi)代謝物進行了鑒定。(4)DZY-02制劑研究:由于DZY-02為難溶性藥物，其吸收的限速過程為溶解過程，本文采用液固壓縮技術以提高DZY-02溶出度和溶解速率。在明確DZY-02基本的理化性質(zhì)基礎上，開展了DZY-02液固壓縮片的處方與工藝研究。以溶解度為

4、指標，篩選了液固壓縮體系的液相組成;考察了不同載體材料、涂層材料對DZY-02液固片溶出行為的影響;對崩解劑的加入方法進行了研究，分別考察了崩解劑內(nèi)加法、外加法和內(nèi)外加法這三種加入方式對液固片劑溶出的影響;最后對影響液固片釋藥的重要參數(shù)——不同藥液比及R值進行了優(yōu)選。分別制備了不同的DZY-02液固處方，并對其進行溶出度研究。同時制備了DZY-02普通片，并以普通片的體外溶出曲線作參比，探討液固壓縮技術在改善DZY-02溶出方面的機制。

5、
　　結果:(1)三批DZY-02原料藥中DZY-02的含量分別為98.96±0.16％％，DZY-02原料藥中共含有4個雜質(zhì)，各雜質(zhì)峰面積之和小于對照溶液主峰面積的1.5倍，各雜質(zhì)峰面積均小于對照溶液主峰面積的l倍。通過對照品比對和有關物質(zhì)峰的一級和二級質(zhì)譜信息，共鑒定出了3個有關物質(zhì)，分別為燈盞乙素，野黃芩素和燈盞甲素乙酯，另一個有關物質(zhì)由于缺少質(zhì)譜信息，暫未推出其結構。(2)通過對高、中、低三個濃度DZY-02在不同小腸段的

6、吸收情況研究，發(fā)現(xiàn)在實驗的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，隨著濃度的增加，DZY-02在不同腸段的吸收均有上升的趨勢，在高濃度無飽和現(xiàn)象，但其吸收速率常數(shù)Ka和有效滲透系數(shù)Peff無顯著性差異(P＞0.05)，且Peff大于0.2×10-4cm·s-1;另外，同一濃度下的DZY-02在十二指腸、空腸和回腸的Ka和Peff均無顯著性差異（P＞0.05）;不同蛋白抑制劑對DZY-02吸收影響的結果顯示鹽酸維拉帕米和利血平對DZY-02在各腸段的吸收速率常數(shù)

7、（Ka）和有效滲透系數(shù)（Peff)均無顯著性差異(P＞0.05)。(3)在體外肝勻漿中共檢測并鑒定了包括原型在內(nèi)的13個代謝產(chǎn)物，體內(nèi)代謝結果顯示，DZY-02在尿液中含量極少，幾乎檢測不到，在糞便中共檢測到包括原型在內(nèi)的4個代謝物。(4) DZY-02在PEG-400中溶解度最大;以Avicel(R) pH102作為載體材料，Syloid244FP作為涂層材料時DZY-02液固處方溶出行為最好;內(nèi)加崩解劑時液固片劑溶出較好且方便;DZ

8、Y-02液固片劑相對普通片溶出度顯著提高。
　　結論:(1)該方法操作簡便、快速、準確、靈敏度高，可用于燈盞乙素乙酯原料藥的含量測定及有關物質(zhì)的檢查。(2) DZY-02為高滲透性藥物，它可能以被動擴散的機制吸收進入體循環(huán);DZY-02在小腸段均有吸收，且無特定吸收窗; DZY-02不是P-gp和BCRP的底物，對DZY-02的吸收無外排作用。(3) DZY-02在肝中的代謝途徑主要是酯類水解、與葡萄糖、葡萄糖醛酸和氨基酸結合、還