燈盞乙素苷元4′-氨甲基苯甲酸酯-7-煙酸酯衍生物的設(shè)計、合成及體外活性研究.pdf

1、目的：設(shè)計、合成燈盞乙素苷元4′-氨甲基苯甲酸酯-7-煙酸酯類衍生物，改善燈盞乙素苷元的理化性質(zhì)，提高其抗氧化活性及血腦屏障通透性。
　　方法：（1）燈盞乙素經(jīng)過硫酸水解、純化制備燈盞乙素苷元，后者經(jīng)縮酮化保護后與N，N-雙取代氨甲基苯甲酸縮合、并經(jīng)脫縮酮保護基得到燈盞乙素苷元4′-N-氨甲基苯甲酸酯類衍生物，所得產(chǎn)物與取代煙酸縮合制備燈盞乙素苷元4′-N-氨甲基苯甲酸酯與煙酸/6-取代煙酸酯化獲得目標(biāo)化合物。（2）用HPLC對合

2、成的化合物進行PBS緩沖液（pH=2.0，7.4）及溶解度的測定。（3）采用PC12細胞氧化損傷模型，評價化合物對氧化損傷細胞的保護作用，通過細胞形態(tài)學(xué)，LDH釋放率、細胞內(nèi)MDA和SOD含量評價目標(biāo)化合物抗氧化作用。（4）采用Caco-2細胞轉(zhuǎn)運模型，測定目標(biāo)化合物從AP側(cè)→BL側(cè)和BL側(cè)→AP側(cè)轉(zhuǎn)運量，計算化合物的表觀滲透系數(shù)（Papp（AP-BL）、Papp（BL-AP））和外排率 ER（ER=Papp（BL-AP）/Papp（A

3、P-BL））。（5）采用原代細胞（BMEC-AS-BMPC）三元共培養(yǎng)模型考察了目標(biāo)化合物體外血腦屏障通透性。
　　結(jié)果：（1）合成燈盞乙素苷元4′-氨甲基苯甲酸酯-7-煙酸酯類衍生物14個(6a-6f,7a-7c,6m,6n,6w,6y,6x)，經(jīng)1H-NMR、UV、ESI-MS和ESI-HRMS等手段對獲得化合物進行結(jié)構(gòu)確證，證實所得化合物與目標(biāo)產(chǎn)物結(jié)構(gòu)一致。（2）理化性質(zhì)研究中發(fā)現(xiàn)合成的燈盞乙素苷元取代煙酸酯類部分衍生物水溶

4、性提高，最大值達到779.1μg?mL-1(燈盞乙素苷元為65.93μg?mL-1)。（3）抗氧化活性研究顯示，與SC相比，化合物6b、6c、6d、6e、6f、6m、6n及6w能夠減少PC12細胞形態(tài)學(xué)損傷、顯著提高氧化損傷的PC12細胞存活率和降低 LDH釋放率(64.31-89.01)；化合物6b、6c、6d、6e、6f、6m、6n及6w能夠顯著降低細胞內(nèi)MDA的含量、升高細胞內(nèi)SOD含量（P＜0.05）。（4）在Caco-2細胞轉(zhuǎn)

5、運研究中，化合物6b、6c、6d、6n及6w的轉(zhuǎn)運量（1.47-3.11×10-6cm?s-1）顯著高于SC（0.53×10-6 cm?s-1）和SC-GA（0.83×10-6 cm·s-1），其中以6c（3.11×10-6 cm?s-1）的轉(zhuǎn)運量最高。（5）體外BBB模型對化合物通透性研究顯示，化合物6b、6c、6d及6n從AP側(cè)到BL側(cè)通透量（0.59-1.65×10-6cm?s-1）顯著高于SC（0.17×10-6 cm·s-1）

6、和SC-GA（0.18×10-6 cm·s-1）。提示燈盞乙素苷元4′-N-氨甲基苯甲酸酯衍生物結(jié)構(gòu)中引入煙酸片段，能通過增加化合物的水溶性、穩(wěn)定性，使化合物抗氧化活性增強，細胞通透性增加，具有進一步研究開發(fā)的價值。
　　結(jié)論：合成了未見文獻報道的14個結(jié)構(gòu)確證的燈盞乙素苷元4′-氨甲基苯甲酸酯-7-煙酸酯類衍生物，理化性質(zhì)以及發(fā)現(xiàn)目標(biāo)化合物的水溶性和體外穩(wěn)定性得到有效的改善；活性研究發(fā)現(xiàn)，煙酸片段的引入提高了化合物對PC12細胞