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文檔簡介
1、重組工程(Red/ET, recombination mediated genetic engineering)是指由重組酶催化的DNA片段之間的同源重組而在大腸桿菌中進(jìn)行基因克隆或DNA改造的一種基因工程技術(shù)。通過重組工程方法理論上可以對細(xì)菌基因組任意大小的DNA片段進(jìn)行敲除和修飾，重組工程的優(yōu)點(diǎn)由于是利用PCR所獲得的DNA片段進(jìn)行轉(zhuǎn)化，省略了基因克隆步驟，因而簡便、快速而高效。
本論文提供了一種通過重組工程來實(shí)現(xiàn)大腸桿菌
2、的基因點(diǎn)突變的方法。首先是通過重組工程將含有同源臂的兩個(gè)I-SceI酶切位點(diǎn)(S)和卡那霉素抗性基因(neo)的基因盒整合至待修飾的基因，含同源臂的S-neo-S基因盒由PCR獲得，此基因盒兩側(cè)還包含了與基因組同源的序列和待引入的突變位點(diǎn)。再經(jīng)過cTc誘導(dǎo)，使I-SceI酶得到表達(dá)。誘導(dǎo)得到的I-SceI酶切割突變菌株上的S位點(diǎn)，從而使基因組發(fā)生斷裂。斷裂的基因組在生存壓力和體內(nèi)重組酶的作用下再次發(fā)生同源重組，從而去掉抗性基因，得到任何
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