棉籽油中主要游離棉酚降解產(chǎn)物化學(xué)結(jié)構(gòu)鑒定及生殖毒性研究.pdf

1、目的：棉籽油中游離棉酚含量檢測(cè)方法及限量已經(jīng)有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，但由于棉籽油中游離棉酚在常溫下極易降解（30天內(nèi)降解80％以上），因此該方法很難反映棉籽油的脫毒情況。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)自制未脫毒棉籽油樣品，考察游離棉酚在棉籽油中的降解情況，確定主要游離棉酚降解產(chǎn)物的存在并鑒定其化學(xué)結(jié)構(gòu)，通過(guò)體內(nèi)、外毒性實(shí)驗(yàn)考察主要游離棉酚降解產(chǎn)物的生殖毒性并建立棉籽油中主要游離棉酚降解產(chǎn)物的含量測(cè)定方法。
　　方法:1.根據(jù)棉籽油生產(chǎn)工藝，本實(shí)驗(yàn)采用正己烷溶劑浸

2、提法提取未脫毒棉籽油樣品，室溫放置。采用HPLC測(cè)定不同放置時(shí)間的棉籽油樣品，建立游離棉酚與降解產(chǎn)物之間的線性關(guān)系。2.采用C18層析柱和半制備型高效液相色譜儀制備主要游離棉酚降解產(chǎn)物，用于質(zhì)譜結(jié)構(gòu)鑒定。3.采用液相色譜-傅立葉變換離子回旋共振質(zhì)譜儀測(cè)定主要游離棉酚降解產(chǎn)物的準(zhǔn)確分子量、推測(cè)分子式并鑒定其結(jié)構(gòu)。4.采用GC-2小鼠精母細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)和小鼠精子畸變實(shí)驗(yàn)考察主要游離棉酚降解產(chǎn)物的體內(nèi)、外毒性。5.建立主要游離棉酚降解產(chǎn)物含量測(cè)

3、定方法，測(cè)定24批市售棉籽油中主要游離棉酚降解產(chǎn)物含量。
　　結(jié)果：1.棉籽油中游離棉酚與降解產(chǎn)物之間的線性關(guān)系為Y=-3.00674395X+2058258982，r=0.9900。2.經(jīng)質(zhì)譜儀檢測(cè)，主要游離棉酚降解產(chǎn)物準(zhǔn)分子離子為573.25033，推測(cè)其分子式為C34H37O8，鑒定其結(jié)構(gòu)為四甲氧基棉酚。3.細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果為：應(yīng)用SPSS Statistics17.0軟件計(jì)算，主要游離棉酚降解產(chǎn)物四甲氧基棉酚對(duì)小鼠GC-2

4、精母細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度IC50為6.554μg/mL。小鼠精子畸變實(shí)驗(yàn)結(jié)果為：空白組小鼠精子畸形率為1.1±0.42%，損傷對(duì)照組小鼠精子畸形率為8.2±0.31%，高劑量組小鼠精子畸形率為4.4±0.51%，中劑量組小鼠精子畸形率為3.0±0.33%，低劑量組小鼠精子畸形率為1.8±0.44%，采用秩和檢驗(yàn)法處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，陽(yáng)性組與對(duì)照組精子畸形率相比P﹤0.05，有顯著性差異，高、中、低試驗(yàn)組與對(duì)照組精子畸形率相比P﹤0.05，有顯著