補中益氣湯對糖尿病胃輕癱大鼠血漿P物質(zhì)及胃竇SCF蛋白表達的影響.pdf

1、目的：應(yīng)用鏈脲佐菌素（STZ）左下腹注射制備糖尿病胃輕癱(diabetic gastroparesis，DGP)大鼠模型，給予中藥補中益氣湯及枸櫞酸莫沙必利對該模型進行干預(yù)治療，利用Westernblot法對胃竇SCF蛋白表達進行測定，放射免疫法檢測血漿SP水平，通過觀察大鼠的一般情況、胃排空率等，研究探討補中益氣湯對糖尿病胃輕癱大鼠胃排空率、胃竇SCF蛋白表達、血漿SP水平的影響，探討補中益氣湯對DGP大鼠胃腸的作用及其可能機制，并為

2、中醫(yī)藥臨床治療DGP提供實驗依據(jù)。
　　方法：雄性wistar大鼠40只，清潔級，重量（200±20）g/只，購自河北醫(yī)科大學(xué)動物中心。將實驗大鼠購回先適應(yīng)性飼養(yǎng)1W，觀察大鼠的一般情況，均正常者用于實驗。取30只禁食12h，將鏈脲佐菌素左下腹注射 STZ55.0mg/kg（用0.1M，PH＝4.2的檸檬酸鈉-檸檬酸緩沖溶液配制成10mg/mL的溶液），觀察造模組出現(xiàn)多飲、多食、多尿后，檢測空腹血糖在16.7mmol/mL以上者為

3、糖尿病模型制備成功，用高能量食料單日上午喂食，雙日下午喂食，打亂大鼠進食規(guī)律，喂養(yǎng)4周,隨機抽取2只大鼠和正常大鼠1只，處死，測胃內(nèi)殘留率較正常大鼠升高，造成胃輕癱模型，在造模過程中大鼠死亡1只。將造模成功后大鼠隨機分成補中益氣湯組、西藥組、模型對照組3組，各9只，另外9只未造模大鼠為非糖尿病正?？瞻捉M，總共為4組。每天記錄3組大鼠的飲水量、食量、尿量、活動情況及大便變化，并每周于大鼠尾靜脈測血糖和稱體重一次。各組均在造模后1W同時開始

4、灌胃給藥，其給藥劑量為：正常組及模型對照組，生理鹽水15mL/kg；補中益氣湯組15mL/kg，西藥組枸櫞酸莫沙必利5mg/kg，分別給大鼠灌胃，每天1次，灌胃共7W。治療滿7W后，各組給予半固體糊(羧甲基纖維素2.6g，淀粉2g,奶粉4 g,蒸餾水62.5 mL配成)，比重為1.1g·mL-1。按照3mL·kg-1體重ig。于30min后將大鼠斷頭處死，然后于斷頭處采5mL血，檢測SP水平，迅速打開大鼠腹腔，并結(jié)扎賁門及幽門，取下整胃

5、，用濾紙輕輕拭干之后，稱量其胃全重。然后沿著大彎切開胃，并以蒸餾水反復(fù)沖洗胃的內(nèi)容物，用濾紙拭干后稱量胃凈重。按公式計算胃排空率:胃排空率=［1-(胃全重-胃凈重)/所給的糊重］×100％。取胃竇部組織(約100mg),提取蛋白質(zhì)，用Western Blot方法測定SCF的蛋白質(zhì)表達水平。
　　結(jié)果：⑴實驗大鼠一般狀況：正常組的大鼠精神狀態(tài)良好，活動自如，進食量、飲水量及尿量均無明顯改變，大鼠體重逐漸增加；模型組大鼠造模后一直持續(xù)

6、出現(xiàn)多飲、多食及多尿，體重逐漸減輕，皮毛毛躁干枯泛黃；中藥組和西藥組大鼠均較模型組的一般情況有一定的改善。在實驗中，由于造模過程不當(dāng)，模型組大鼠有一只死亡；⑵大鼠體重變化：與正常組大鼠相比較，模型組、中藥組及西藥組大鼠的體重均有明顯減輕，其差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；中藥組和西藥組大鼠的體重與模型組相比有所增加，其差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；中藥組體重較西藥組有所增加，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；⑶大鼠血糖變化：

7、模型組、中藥組及西藥組的大鼠血糖均較正常組明顯升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；中藥組大鼠的血糖水平與模型組大鼠相比，血糖降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；西藥組和模型組大鼠血糖相比較，血糖降低，其差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05）；中藥組和西藥組血糖相比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05）；⑷大鼠的胃竇平滑肌組織應(yīng)用蘇木素-伊紅（HE)染色顯示：正常組大鼠胃竇粘膜組織結(jié)構(gòu)完整，血管豐富，腺體排列整齊；中藥組、西藥組胃竇粘

8、膜尚完整，血管較豐富，腺體排列比較整齊；模型組大鼠胃竇粘膜不完整，血管數(shù)量明顯減少，腺體排列紊亂；⑸大鼠胃排空率與正常組相比，模型組、中藥組、西藥組大鼠的胃排空率下降，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；中藥組、西藥組大鼠胃排空率較模型組相比均明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；中藥組和西藥組胃排空率比較，胃排空率高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；⑹大鼠血漿SP水平變化：模型組、中藥組、西藥組大鼠的血漿SP水平低于正常組，差

9、異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；中藥組和模型組比較大鼠血漿 SP減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；西藥組和模型組比較大鼠血漿 SP減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；中藥組和西藥組比較升高血漿 SP水平效果無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05）；⑺大鼠胃竇 SCF蛋白表達：模型組、中藥組、西藥組大鼠胃竇SCF蛋白表達低于正常組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；中藥組和模型組比較大鼠SCF蛋白表達減少差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；

10、西藥組和模型組比較大鼠SCF蛋白表達減少差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)；中藥組和西藥組比較升高SCF蛋白表達效果有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05）。
　　結(jié)論：①糖尿病胃輕癱大鼠存在胃腸運動障礙，補中益氣湯能夠降低DGP大鼠血糖水平，提高大鼠胃排空率，可能為其治療DGP的作用機制之一。②補中益氣湯促進大鼠的胃排空治療DGP大鼠，可能通過提高大鼠血漿SP水平，增加胃腸道蠕動，進而促進胃排空。③補中益氣湯可以通過提高大鼠胃竇SCF蛋白表達