(Val8)GLP-1-Glu-PAL對MPTP誘導(dǎo)的PD模型小鼠行為損傷、病理變化及凋亡蛋白表達的研究.pdf

1、背景：
　　PD（Parkinson’s disease，PD）是一種常見的侵害老年人神經(jīng)系統(tǒng)的退行性疾病。迄今為止，雖然其致病原因及機制尚未完全闡明，但已知的主要的病理特征為黑質(zhì)致密區(qū)多巴胺能神經(jīng)元缺失導(dǎo)致的黑質(zhì)--紋狀體通路變性失調(diào)，使多巴胺能神經(jīng)遞質(zhì)不足，從而使錐體外系運動調(diào)節(jié)功能喪失，主要臨床癥狀有：運動障礙、靜止性震顫等。危險因素除了老化、氧化應(yīng)激、環(huán)境因素、遺傳因素、線粒體功能障礙等外，晚近研究證明：胰島素（insul

2、in，INS）及信號傳導(dǎo)通路障礙可能是PD的病因之一[1]，并且糖尿病是PD的一個獨立危險因素[2-4]。這提示使用治療糖尿病的藥物防治PD的可能性。胰高血糖素樣多肽-1（Glucagon-like peptide-1，GLP-1）作為目前糖尿病新型的治療性藥物，其功能由GLP-1受體（Glucagon-like peptide-1 receptor， GLP-1R）介導(dǎo)，可以調(diào)節(jié)胰島素信號通路。胰島素信號通路不僅參與腦內(nèi)各種生理過程，

3、也參與了神經(jīng)細胞的生長發(fā)育、神經(jīng)遞質(zhì)的釋放調(diào)節(jié)[24]。因此，我們提出GLP-1新型類似物（Val8）GLP-1-Glu-PAL對MPTP誘導(dǎo)的PD小鼠多巴胺能神經(jīng)損傷具有抑制作用的假說并驗證之。
　　目的：
　　研究（Val8）GLP-1-Glu-PAL能否逆轉(zhuǎn)MPTP誘導(dǎo)的PD模型小鼠行為損傷、多巴胺能神經(jīng)元病理改變以及相關(guān)凋亡蛋白的表達。
　　方法：
　　健康雄性C57BL/6小鼠56只，10-12周，隨機

4、分為四組：對照組、MPTP組、（Val8）GLP-1-Glu-PAL組（簡稱Val8組）、MPTP+Val8組。 MPTP組小鼠腹腔注射MPTP(30 mg/kg·d)，同時對照組給予等體積0.9％氯化鈉注射液，Val8組腹腔注射（Val8）GLP-1-Glu-PAL（25 nmol/kg），MPTP+Val8組注射完MPTP1 h后注射（Val8）GLP-1-Glu-PAL，連續(xù)8天。每日藥物注射2 h后進行游泳實驗及轉(zhuǎn)棒實驗，觀測小

5、鼠行為變化。第8天行為學(xué)測試完1h后立即處死小鼠。免疫組化法檢測小鼠黑質(zhì)致密部酪氨酸羥化酶陽性細胞數(shù)，TUNEL法檢測小鼠黑質(zhì)部位神經(jīng)元凋亡情況。蛋白免疫印跡法檢測TH、Bcl-2、Bax、Pro-caspase3、Cleaved-caspase3表達情況。
　　結(jié)果:
　　1、MPTP組小鼠的活躍程度隨著MPTP的毒性累積作用而逐漸下降。
　　2、游泳實驗及轉(zhuǎn)棒實驗結(jié)果顯示，與對照組相比，MPTP組小鼠的平衡協(xié)調(diào)能力

6、均很差（P<0.05）。但經(jīng)過（Val8）GLP-1-Glu-PAL治療后，與MPTP組相比運動能力均有所升高（P<0.05）。
　　3、TH免疫組化結(jié)果顯示，與對照組相比，MPTP組小鼠中腦黑質(zhì)部位TH陽性神經(jīng)元明顯減少（P<0.05），治療后的小鼠TH陽性神經(jīng)元則相對增多（P<0.05）。
　　4、TUNEL染色結(jié)果顯示，MPTP組小鼠中腦黑質(zhì)部位陽性凋亡細胞明顯較對照組多（P<0.05），MPTP+Val8組則較MPT

7、P組少（P<0.05）。
　　5、Western blot檢測結(jié)果顯示，與對照組相比， MPTP組小鼠TH、Bcl-2、Pro-caspase3表達量顯著減少（P<0.05），Bax、Cleaved-caspase3表達量則相對增多（P<0.05）；與MPTP組相比，MPTP+Val8組TH、Bcl-2、Pro-caspase3表達量增加（P<0.05），Bax、Cleaved-caspase3表達量減少(P<0.05)。

8、　　結(jié)論:
　　1、MPTP成功誘導(dǎo)C57BL/6小鼠使其出現(xiàn)PD的典型行為學(xué)特征，而（Val8） GLP-1-Glu-PAL會明顯改善PD小鼠的行為異常。
　　2、（Val8）GLP-1-Glu-PAL有效的逆轉(zhuǎn)了中腦黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元的凋亡，對MPTP誘導(dǎo)的多巴胺神經(jīng)損傷具有保護作用。
　　3、（Val8）GLP-1-Glu-PAL可以調(diào)節(jié)PD小鼠腦內(nèi)Bcl-2、Bax、Pro-caspase3、以及Cleaved