PKC-CREB信號通路在低鎂誘導的細胞癲癇模型中對GABAaRα1,γ2和δ亞基表達的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、目的：
　　本文以PKC-CREB信號通路為切入點，以低鎂處理的海馬神經(jīng)元為研究對象，觀察癲癇發(fā)生后GABAaRα1，γ2和δ亞基的變化,探討PKC-CREB信號通路在癲癇發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　方法:
　　1.從18天胎鼠中分離出海馬神經(jīng)元，通過低鎂液處理神經(jīng)元3 h，構(gòu)建神經(jīng)元癲癇樣放電模型，利用qRT-PCR檢測CREB基因和GABA基因的轉(zhuǎn)錄水平；
　　2.在低鎂液處理模型中，應用CRBE-CBP阻斷劑或

2、p-CREB抑制劑，利用qRT-PCR檢測GABAaRα1,γ2和δ亞基的變化，利用western blotting檢測GABAaRα1,CREB,P-CREB的表達水平,研究模型中CREB激活后調(diào)節(jié)GABAaRα1,γ2和δ亞基的機制；
　　3.在PMA處理模型中，應用CRBE-CBP阻斷劑或PKC抑制劑分別處理神經(jīng)元，利用qRT-PCR檢測GABAaRα1，γ2和δ亞基的轉(zhuǎn)錄水平，研究PKC-CREB信號通路對其調(diào)節(jié)機制。

3、r>　　結(jié)果：
　　1.在低鎂液處理模型中，孵育間隔9h后，CREB和GABA基因的轉(zhuǎn)錄水平均明顯升高，同時在不同時間間隔中觀察到，CREB基因的轉(zhuǎn)錄水平總體呈上升趨勢，而GABA基因的轉(zhuǎn)錄水平總體呈下降趨勢，推測并分析兩者基因的表達呈負性相關性。
　　2.在低鎂液處理模型中，應用P-CREB抑制劑或CREB-CBP阻滯劑孵育，發(fā)現(xiàn)P-CREB抑制劑處理組中GABAaRα1的轉(zhuǎn)錄水平的上調(diào)，而加入P-CREB抑制劑或CREB

4、-CBP阻滯劑組中GABAaRγ2和δ亞基均出現(xiàn)轉(zhuǎn)錄水平的上調(diào)。
　　3.在PMA處理模型中,發(fā)現(xiàn)GABAaRα1，γ2和δ亞基的轉(zhuǎn)錄水平均下調(diào)相比正常海馬神經(jīng)元組，同時再次應用CRBE-CBP阻斷劑或PKC抑制劑分別處理神經(jīng)元，發(fā)現(xiàn)GABAaRα1，γ2和δ亞基的轉(zhuǎn)錄水平出現(xiàn)明顯改變，推測通過 PKC-CREB信號通路對其調(diào)節(jié)機制。
　　結(jié)論：
　　在低鎂液處理海馬神經(jīng)元模型中，PKC-CREB信號通路對GABAaR