重組人IgE Fc的制備及抑制IgE介導(dǎo)的Ⅰ型過敏反應(yīng)的功能探索研究.pdf

1、目的：考察重組人IgE Fc對由IgE介導(dǎo)的過敏反應(yīng)是否具有抑制作用以及其作為臨床抗過敏藥物的潛力。
　　方法：通過基因工程技術(shù)，獲得表達重組人IgE Fc的CHO細胞株，建立CHO細胞培養(yǎng)工藝和重組人IgE Fc的分離純化工藝制備重組人IgE Fc的純化樣品，并應(yīng)用于功能評價研究。在體外試驗中，利用流式細胞方法分析檢測重組人IgE Fc與表達人 FcεRIα的CHO細胞（CHO3D10）的結(jié)合考察重組人IgE Fc與FcεRI的

2、親和力，并與人源IgE進行比較。轉(zhuǎn)人基因的大鼠細胞嗜堿性粒細胞（EG-RBL2H3）活化試驗中，通過檢測組胺釋放量的變化考察重組人IgE Fc對過敏原/特異IgE引發(fā)嗜堿性粒細胞活化的抑制作用。最后，在猴體上，通過檢測藍斑大小的變化，評估重組人IgE Fc對IgE介導(dǎo)的被動皮膚過敏（Passive Cutaneous Anaphylaxis，PCA）反應(yīng)的抑制作用。
　　結(jié)果：構(gòu)建并獲得30株高表達重組人IgE Fc的CHO細胞克

3、隆株；對細胞培養(yǎng)過程進行了優(yōu)化，通過濃縮培養(yǎng)基的流加，重組人IgE Fc的表達滴度比分批培養(yǎng)提高了83.8％；在對數(shù)生長期結(jié)束時降低培養(yǎng)溫度到32℃，重組人IgE Fc的表達滴度進一步增加了18%；建立了由陰離子交換和疏水層析為主的分離純化工藝，產(chǎn)物的最終純度達到98%。流式分析結(jié)果表明重組人IgE Fc與FcεRI的親和力高于人IgE；EG-RBL2H3細胞活化試驗中，當(dāng)重組人IgE Fc濃度達到致敏NP-IgE濃度的5倍時，組胺釋放