794ap（昔美酸沙美特羅）改善胰島素抵抗機制的初步研究.pdf

1、背景：Ⅱ型糖尿?。═2DM）是一種復(fù)雜的內(nèi)分泌代謝紊亂性疾病，已成為繼心血管疾病、惡性腫瘤之后第三大嚴(yán)重威脅人類健康的非傳染性疾病。而胰島素抵抗是Ⅱ型糖尿病的發(fā)病基礎(chǔ)，并貫穿于Ⅱ型糖尿病的整個病理過程中。過氧化物酶體增殖物激活受體（Peroxisome proliferators activated receptors,PPARs)是人類代謝相關(guān)疾病防治藥物的重要靶點，屬于非甾體類核受體超家族。其中PPARγ是研究胰島素抵抗的關(guān)鍵靶點之

2、一，參與眾多的復(fù)雜的信號通路進(jìn)而發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)，比如PPARγ與PI3K-AKT激酶信號通路，PPARγ在PI3K信號通路中可以促進(jìn)AKT的表達(dá)，增強胰島素敏感性，并促進(jìn)GluT4基因的表達(dá)，促進(jìn)對葡萄糖的攝?。籔PARγ與ADIPOQ，脂聯(lián)素可以增加胰島素敏感性，具有抗炎保護(hù)內(nèi)皮等功能，是PPARγ激動劑作用的新靶點，能刺激AMPK磷酸化，許多效應(yīng)是通過AMPK途徑實現(xiàn)。PPARγ激動劑主要是能通過作用于脂肪組織，促進(jìn)葡萄糖向脂肪組

3、織轉(zhuǎn)運、促進(jìn)脂肪細(xì)胞的分化等環(huán)節(jié)，實現(xiàn)其胰島素增敏從而降低血糖的藥理作用。大量文獻(xiàn)表明高抑制CDK5介導(dǎo)的p-PPARγSer273的配體化合物是最佳的候選抗糖尿病藥物。前期研究發(fā)現(xiàn)794ap（昔美酸沙美特羅）能降低Ⅱ型糖尿病SD大鼠的血糖，后進(jìn)行分子動力學(xué)研究發(fā)現(xiàn)其與PPARγ受體結(jié)合度比較高。因此本文通過建立胰島素抵抗細(xì)胞模型并結(jié)合Western Blot、IHC、ICC和qRT-PCR實驗方法對794ap降糖并改善胰島素抵抗的作用

4、機制進(jìn)行初步的探究。
　　目的：初步探討794ap改善胰島素抵抗及降糖的作用機制。
　　方法：運用分子對接技術(shù)找出794ap與PPARγ的蛋白晶體結(jié)合的最佳構(gòu)象，采用分子動力學(xué)模擬PPARγ受體激動劑794ap與PPARγ受體的結(jié)合模式，用Amber做動力學(xué)研究并使用MM-PBSA法計算其結(jié)合自由能。
　　探索胰島素誘導(dǎo)的最佳濃度最佳濃度和時間，建立HepG2胰島素抵抗模型。并用MTT法檢測794ap作用于HepG2胰

5、島素抵抗模型后，計算細(xì)胞的存活率并選擇合適的藥物濃度梯度并結(jié)合文獻(xiàn)報道作為接下來實驗的藥物濃度；將794ap作用于HepG2胰島素抵抗模型并做相應(yīng)的葡萄糖檢測試驗，以反應(yīng)藥物的效果；Western blot檢測蛋白含量，以羅格列酮作為陽性藥物，觀察794ap對PPARγ、AMPKα1、AKT2、ADIPOQ、JAK2的影響；免疫細(xì)胞化學(xué)（ICC）和免疫組化組織（IHC）水平研究PPARγ等各蛋白在胰島素抵抗的HepG2細(xì)胞及大鼠肝臟和胰

6、腺組織中宏觀的表達(dá)；qRT-PCR方法檢測PPARγ、ADIPOQ、AMPKα1 mRNA表達(dá)。
　　結(jié)果：794ap與受體2XKW和4EMA的復(fù)合物在進(jìn)行MD30ns后都達(dá)到動態(tài)平衡，形成穩(wěn)定的復(fù)合物結(jié)構(gòu)且794ap與受體2XKW結(jié)合的效果最好，范德華力在結(jié)合過程中起了關(guān)鍵作用。
　　成功建立HepG2細(xì)胞胰島素抵抗模型，且WB實驗顯示794ap能抑制p-PPARγSer273的表達(dá)，上調(diào)p-PPARγSer112、AMP

7、Kα1、p-AMPKα1、ADIPOQ、p-AKT2的表達(dá)，但794ap并不上調(diào)JAK2、p-JAK2、ERK1/2和p- ERK1/2蛋白的表達(dá)；加入抑制劑T0070907后，794ap對PPARγ等蛋白表達(dá)的影響依舊不變；794ap對SD大鼠肝臟、胰腺組織和IR-HepG2細(xì)胞PPARγ等蛋白的影響與WB結(jié)果一致；794ap上調(diào)ADIPOQ和AMPKα1的mRNA表達(dá)，但并不增加PPARγmRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)論：經(jīng)過實驗

8、室前期的實驗研究證明794ap（昔美酸沙美特羅）能降低Ⅱ型糖尿病SD大鼠的血糖，改善胰島素抵抗。分子動力學(xué)模擬結(jié)果驗證了794ap與PPARγ的受體結(jié)合緊密，理論上證明是PPARγ的激動劑，且Western blot、IHC、ICC和qRT-PCR結(jié)果顯示794ap可以通過抑制p-PPARγSer273，上調(diào)AMPKα1、AKT2和ADIPOQ的表達(dá)來改善IR-SD大鼠和IR-HepG2細(xì)胞的胰島素抵抗，增加其對胰島素的敏感性，從而產(chǎn)生