G-CSF誘導(dǎo)小鼠造血干細(xì)胞動(dòng)員過程中成骨細(xì)胞及破骨細(xì)胞的變化.pdf

1、目的:造血干細(xì)胞(HSC)目前被廣泛用于移植治療惡性血液系統(tǒng)疾病，采集足夠量的造血干細(xì)胞是移植治療成功的關(guān)鍵前提，近年研究明確，骨髓微環(huán)境中存在著兩種以上的骨髓龕，其中骨內(nèi)膜龕對(duì)維持造血干細(xì)胞的穩(wěn)定靜止起著重要作用，而成骨細(xì)胞是骨內(nèi)膜龕的重要組成部分，大量實(shí)驗(yàn)表明，G-CSF動(dòng)員后成骨細(xì)胞數(shù)量減少，功能減低，破骨細(xì)胞作為與成骨細(xì)胞相反作用的細(xì)胞，在動(dòng)員過程中發(fā)生什么變化，值得我們?nèi)パ芯?，本研究以小鼠為研究?duì)象，觀察G-CSF動(dòng)員對(duì)小鼠成

2、骨、破骨細(xì)胞的影響，以及通過PTH誘導(dǎo)激活破骨細(xì)胞，觀察對(duì)造血干細(xì)胞動(dòng)員的影響。
　　方法:利用流式細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)動(dòng)員O、3、5天小鼠外周血干細(xì)胞比例，觀察G-CSF誘導(dǎo)動(dòng)員的情況，通過實(shí)時(shí)定量-多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RQ-PCR)檢測(cè)動(dòng)員前后骨髓細(xì)胞骨鈣素(OCN)、基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1（SDF-1）和基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP9)的mRNA表達(dá)，免疫組織化學(xué)檢測(cè)骨髓OCN（成骨細(xì)胞特異性表達(dá)）陽性細(xì)胞的數(shù)量來比較動(dòng)員前后成骨細(xì)胞的數(shù)量和

3、功能上的變化，ELISA法檢測(cè)小鼠周血TRACP-5b的濃度反應(yīng)破骨細(xì)胞活性，抗酒石酸磷酸酶（TRAP）染色檢測(cè)小鼠股骨中破骨細(xì)胞數(shù)量，評(píng)價(jià)G-CSF動(dòng)員對(duì)成骨、破骨細(xì)胞的影響。大劑量PTH(甲狀旁腺素)激活破骨細(xì)胞，觀察激活破骨細(xì)胞后能否產(chǎn)生HSC動(dòng)員效應(yīng)。
　　結(jié)果:
　　1.骨髓SDF-1和OCN表達(dá)減少，提示成骨細(xì)胞功能降低;MMP9表達(dá)增高，提示中性粒細(xì)胞釋放MMP9，骨髓基質(zhì)發(fā)生蛋白水解。
　　2.顯微鏡下

4、觀察動(dòng)員后骨髓成骨細(xì)胞數(shù)量減少，形態(tài)由原來卵圓形變?yōu)樗笮沃帘馄较А?br>　　3.小鼠外周血TRACP-5b增多，0天（4.43±0.52IU/L）、5天（10.49±1.75mIU/mL），提示破骨細(xì)胞活性增高;TRAP染色提示注射G-CSF后破骨細(xì)胞數(shù)量增多。
　　4.大劑量PTH激活破骨細(xì)胞能夠產(chǎn)生HSC動(dòng)員效應(yīng)。
　　結(jié)論:G-CSF動(dòng)員后成骨細(xì)胞數(shù)量及活性降低，導(dǎo)致SDF-1趨化能力減弱，破壞造血干細(xì)胞靜止?fàn)顟B(tài)引