G-CSF和GM-CSF動員小鼠外周血干細(xì)胞效果的比較研究.pdf

1、目的：比較粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)和粒-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)對小鼠外周血造血干細(xì)胞的動員作用，并檢測動員過程中小鼠外周血T淋巴細(xì)胞亞群的變化，從而選擇最佳的動員方案。 方法： 1．分組與給藥方法BALB/c小鼠，隨機(jī)分成6組，每組12只。 (1)實(shí)驗(yàn)組：共分成5組。 A組：連續(xù)5天皮下注射重組人G-CSF(rhG-CSF)400 gg·kg<’-1>d<’-1>。

2、 B組：連續(xù)5天皮下注射重組人GM-CSF(rhGM-CSF)400 μg·kg<’-1>·d<’-1>。 C組：連續(xù)5天同時皮下注射G-CSF 200μg·kg<’-1>·d<’-1>。＋GM-CSF 200 μg·kg<’-1>·d<’-1>。 D組：前3天連續(xù)皮下注射GM-CSF 400μg·kg<’-1>·d<’-1>，后2天皮下注射G-CSF400μg·kg<’-1>·d<’-1>。 E組：

3、前3天連續(xù)皮下注射G-CSF 400μg·kg<’-1>·d<’-1>，后2天皮下注射GM-CSF400μg·kg<’-1>·d<’-1>。 (2)對照組：連續(xù)5天皮下注射生理鹽水0.2 ml。 2．檢測指標(biāo)與方法在動員不同時間點(diǎn)進(jìn)行檢測。 (1)外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)采用顯微鏡計(jì)數(shù)法。 (2)外周血CD34<’＋>、CD34<’＋>CD<,38><’->細(xì)胞檢測采用流式細(xì)胞儀(FCM)檢測。

4、 (3)外周血T淋巴細(xì)胞亞群檢測采用FCM檢測。 (4)外周血造血干細(xì)胞集落培養(yǎng)粒-單核細(xì)胞集落形成單位(CFU-GM)的培養(yǎng)采用半固體瓊脂培養(yǎng)法。 結(jié)果： 1.外周血白細(xì)胞的變化小鼠注射動員劑后，除對照組外，各實(shí)驗(yàn)組在注射后24小時白細(xì)胞升高幅度最大，白細(xì)胞數(shù)均在第5天達(dá)高峰，明顯高于對照組和用藥前(P<0.01)。 2.外周血CD<,34><'+>、CD<,34><'+>CD<,38><'->細(xì)胞

5、變化予動員劑后，除對照組外，各實(shí)驗(yàn)組隨用藥時間延長CD<,34><'+>細(xì)胞、CD<,34><'+>CD<,38><'->細(xì)胞比例逐漸升高，第4天升高幅度較大，第5天各實(shí)驗(yàn)組均達(dá)高峰。高峰期各實(shí)驗(yàn)組CD<,34><'+>細(xì)胞、CD<,34><'+>CD<,38><'->細(xì)胞比例顯著高于對照組及動員前(P<0.001)。實(shí)驗(yàn)組中，A組CD<,34><'+>細(xì)胞比例顯著高于B組(P<0.001)，C、D、E組CD<,34><'+>細(xì)胞比例較

6、A組明顯增高(P<0.05)；C、D、E組CD<,34><'+>CD<,38><'->細(xì)胞比例明顯高于A組(P<0.001)；B組CD<,34><'+>CD<,38><'->細(xì)胞比例顯著高于C、D、E組(P<0.001)。第6天，除對照組外，各實(shí)驗(yàn)組CD<,34><'+>細(xì)胞、CD<,34><'+>CD<,38><'->細(xì)胞比例迅速下降。 3.外周血CFU-GM產(chǎn)率比較在動員第4、5、6天，各實(shí)驗(yàn)組外周血CFU-GM數(shù)均顯著高于

7、對照組及動員前(P<0.001)，各組CFU-GM產(chǎn)率均在第5天達(dá)高峰值，C、D、E組CFU-GM數(shù)明顯高于A、B組(P<0.05)。第6天各實(shí)驗(yàn)組外周血CFU-GM數(shù)均顯著低于第5天CFU-GM數(shù)(P<0.01)。 4.外周血T淋巴細(xì)胞亞群變化動員第5天，各實(shí)驗(yàn)組外周血CD<,3><'+>細(xì)胞比例均顯著高于對照組及動員前(P<0.001)；CD<,3><'+>CD<,8><'+>細(xì)胞比例明顯高于對照組及動員前(P<0.05)，

8、CD<,3><'+>CD<,4><'+>／CD<,3><'+>CD<,8><'+>的比值較對照組及動員前降低(P<0.05)；CD<,3><'+>CD<,4><'->CD<,8><'->細(xì)胞比例明顯高于對照組及動員前(P<0.001)，CD<,3><'+>CD<,4><'->CD<,8><'->細(xì)胞比例增高的順序依次為實(shí)驗(yàn)B組>D組>C組>E組>A組。即單用GM-CSF組最高，單用G-CSF組最低。 結(jié)論： 1.G-CS

9、F與GM-CSF聯(lián)合方案動員CD<,34><'+>細(xì)胞、CD<,34><'+>CD<,38><'->細(xì)胞和CFU-GM產(chǎn)率較高，收集的造血干細(xì)胞更具有早期干細(xì)胞的特征。 2.G-CSF與GM-CSF聯(lián)合方案動員后CD<,3><'+>細(xì)胞、CD<,3><'+>CD<,8><'+>細(xì)胞及CD<,3><'+>CD<,4><'->CD<,8><'->細(xì)胞比例較動員前明顯升高，有利于發(fā)揮T細(xì)胞的免疫負(fù)調(diào)控作用。 3.G-CSF聯(lián)合