G-CSF對造血干細(xì)胞移植健康供者淋巴細(xì)胞亞群的影響.pdf

1、目的：研究 rhG-CSF動員前后造血干細(xì)胞移植供者的淋巴細(xì)胞各亞群絕對值及比例的變化情況。以指導(dǎo)對移植后急、慢性移植物抗宿主病和移植后患者免疫重建的預(yù)測。
　　方法：
　　1供者資料
　　.所有供者均經(jīng)過外周血、骨髓及相關(guān)臟器功能檢查未見明顯異常，并簽署相關(guān)知情同意書。
　　2動員采集方案
　　采用rhG-CSF10μg/kg q12h皮下注射進(jìn)行動員。親緣供者于動員第4天采集骨髓干細(xì)胞；第5天采集外周血

2、干細(xì)胞；如采集數(shù)量未達(dá)到移植標(biāo)準(zhǔn)；則第6天繼續(xù)動員、采集，直至滿足移植所需細(xì)胞數(shù)。非血緣供者于第5、6天集外周血干細(xì)胞。
　　3標(biāo)本采集
　　供者動員前和采集日上機(jī)采集前抽血送檢血常規(guī)；記錄其中白細(xì)胞計數(shù)、淋巴細(xì)胞計數(shù)、單核細(xì)胞計數(shù)。淋巴細(xì)胞免疫表型檢測：針對外周血做研究的供者另于動員前及采集前留取外周血3ml；針對骨髓研究的供者于移植前查體階段以及采集骨髓時各留取骨髓2ml。標(biāo)本采集后即刻送檢。
　　4外周血淋巴細(xì)胞

3、亞群檢測
　　采用流式細(xì)胞儀檢測；檢測動員前后供者外周血內(nèi) CD3+T淋巴細(xì)胞（免疫表型 CD3+，下同）、CD4+T淋巴細(xì)胞（CD3+CD4+）、CD8+T淋巴細(xì)胞(CD3+CD8+)、T調(diào)節(jié)細(xì)胞（CD3+CD4+CD25+FoxP3+）、初始 CD4+T細(xì)胞（CD3+CD4+CD62L+CD45RA+CD45RO-）、記憶 CD4+T細(xì)胞（CD3+CD4+CD45RO+）、初始CD8+T細(xì)胞（CD3+CD8+CD45RA+）、

4、記憶CD8+T細(xì)胞（CD3+CD8+CD45RO+）B細(xì)胞（CD19+）、未成熟 B細(xì)胞（CD19+CD10+CD27-CD38+）、初始B細(xì)胞（CD27+CD19+）、記憶B細(xì)胞（CD27+CD19+）的絕對值及比例。
　　5骨髓淋巴細(xì)胞亞群檢測
　　對供者查體階段及骨髓采集時的骨髓進(jìn)行有核細(xì)胞計數(shù)，同時予FCM檢測骨髓內(nèi)T、B淋巴細(xì)胞百分比例：即CD3+細(xì)胞、CD19+細(xì)胞所占比例。進(jìn)一步標(biāo)記可以測出CD3+細(xì)胞群中CD

5、4+、CD8+、CD4-CD8-細(xì)胞，以及CD4+CD25+細(xì)胞所占比例；CD28+陽性細(xì)胞所占CD4+細(xì)胞、CD8+細(xì)胞比例值，結(jié)合有核細(xì)胞計數(shù)結(jié)果得到各亞群細(xì)胞絕對值
　　6統(tǒng)計學(xué)處理
　　以SPSS21.0進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，根據(jù)數(shù)據(jù)符合正態(tài)性與否選擇配對樣本t檢驗或Wilcoxon秩和檢驗，以P<0.05作為有統(tǒng)計學(xué)意義的標(biāo)準(zhǔn)。
　　結(jié)果：
　　1供者動員采集情況：
　　1.1所有供者動員、采集過程順利

6、，無嚴(yán)重不良反應(yīng)發(fā)生。
　　1.2動員效果：動員后供者外周血白細(xì)胞計數(shù)、中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞計數(shù)、單核細(xì)胞計數(shù)均上升,但淋巴細(xì)胞絕對值上升不明顯，動員前后白細(xì)胞計數(shù)為6.38±1.90×109/L vs46.83±8.51×109/L（P<0.001）；中性粒細(xì)胞計數(shù)3.54±1.27×109/L vs42.80±7.99×109/L（P<0.001）、淋巴細(xì)胞計數(shù)2.21±0.89×10^9/L vs2.55±0.78×109/

7、L(P=0.11)單核細(xì)胞計數(shù)0.45±0.16×109/L vs1.41±0.89×109/L（P<0.001）
　　2動員前后外周血T細(xì)胞亞群比較
　　2.1動員前后CD3+T細(xì)胞、CD3+CD4+T細(xì)胞、CD3+CD8+T細(xì)胞的絕對值出現(xiàn)有統(tǒng)計學(xué)意義的升高(P值均<0.001），而其各自所占百分比則均無統(tǒng)計學(xué)差異（P值依次為：0.785、0.376、0.757）；動員前后外周血 CD4/8比值也無明顯統(tǒng)計學(xué)差異（P=0

8、.757）。以上結(jié)果提示；G-CSF動員后外周血中CD3+T細(xì)胞、CD3+CD4+T細(xì)胞、CD3+CD8+T細(xì)胞呈等比例增加。
　　2.2動員后外周血 Treg絕對值較動員前稍有增高，但無統(tǒng)計學(xué)差異，所占淋巴細(xì)胞百分比也無統(tǒng)計學(xué)差異。（P值分別為0.061、0.924）
　　2.3動員前后初始、記憶CD4+T細(xì)胞的比較：動員前后初始CD4+T細(xì)胞絕對值為：0.24（0.26）×109/L vs0.025（0.079）×109

9、/L（P=0.003）；百分比為：10.52±5.57％vs0.43（15.2）%（P<0.001）均呈有統(tǒng)計學(xué)意義的下降趨勢；記憶CD4+T細(xì)胞絕對值增高(P<0.001)，但百分比未見統(tǒng)計學(xué)差異（P=0.108）
　　2.4動員前后初始、記憶CD8+T細(xì)胞的比較：動員前后外周血初始CD8+T細(xì)胞絕對值差異有統(tǒng)計學(xué)意義：0.30±0.17×109/L vs0.62±0.52×109/L（P<0.001）；百分比未見統(tǒng)計學(xué)差異（P

10、=0.80）；動員前后外周血記憶CD8+T細(xì)胞絕對值差異有統(tǒng)計學(xué)意義0.30±1.17×109/L vs0.52±0.37×109/L（P<0.001）；百分比未見明顯統(tǒng)計學(xué)差異（P=0.407）；提示這兩類細(xì)胞亞群動員后為成比例增加
　　3動員前后外周血B淋巴細(xì)胞亞群比較：
　　3.1動員前后外周血總體 B細(xì)胞絕對值和百分比均明顯升高（P值均<0.001）；
　　3.2動員前后外周血未成熟 B細(xì)胞絕對值升高為0.22

11、（0.26）×109/L vs0.56（0.51）×109/L（P=0.009）有統(tǒng)計學(xué)意義；百分比為0.07（0.12）%vs0.12（0.14）%（P=0.158）無統(tǒng)計學(xué)意義
　　3.3動員前后外周血初始 B細(xì)胞明顯增加：絕對值為0.26±0.16×109/L vs0.72±0.61×109/L（P<0.001）；百分比為9.80±4.27% vs14.32±5.95%（P<0.001）?？赡茉黾邮苷咭浦埠蟮腸GVHD風(fēng)險。

12、
　　3.4記憶 B細(xì)胞動員前后絕對值明顯升高0.063±0.053×109/L vs0.14±0.13×109/L（P<0.001）；百分比為2.55±1.86% vs2.73±1.99%（P=0.434）無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　這些結(jié)果表明，供者動員前后外周血各個階段B細(xì)胞計數(shù)均有上升，但以初始B細(xì)胞為著。
　　4動員前后骨髓內(nèi)各細(xì)胞成分比較：
　　4.1動員后供者骨髓有核細(xì)胞數(shù)明顯增加：（P<0.001）

13、>　　4.2動員前后骨髓淋巴細(xì)胞數(shù)變化不明顯：（P=0.445）；顯示動員后雖然骨髓增生明顯活躍，但骨髓內(nèi)淋巴細(xì)胞總數(shù)變化不大。
　　4.3動員前后骨髓CD3+細(xì)胞比較：動員前后骨髓內(nèi)CD3+T細(xì)胞絕對值為1.40（1.8）×109/L vs1.50（1.84）×109/L(P=0.333)；百分比為69.76±6.22%、70.96±7.74%（P=0.588）均無明顯統(tǒng)計學(xué)差異。
　　4.4動員前后 CD3+CD4+T細(xì)

14、胞比較：動員前 CD3+CD4+T絕對值為0.84(1.63)×109/L vs0.64（1.07）×109/L（P=0.047）；47.60±9.90%vs41.00±7.72%（P=0.015）均呈有統(tǒng)計學(xué)意義的減少
　　4.5 CD3+CD8+T細(xì)胞：0.82（0.74）×109/L、0.85（0.71）×109/L（P=0.386）；42.64±9.82%、48.71±9.03%（P=0.002）其絕對值無明顯差異，而百分

15、比明顯升高。同時動員后骨髓CD4/8比值明顯減低1.21±0.53 vs0.89±0.31（P=0.012）
　　4.6動員后DNT細(xì)胞的絕對值及百分比增高：0.14（0.26）×109/L vs0.17（0.28）×109/L（P=0.047）；8.48±4.65%vs9.61±3.90%（P=0.218）
　　4.7骨髓內(nèi) CD4+CD28+細(xì)胞在動員后絕對值以及百分比均下降；分別為0.80（0.80）×109/L vs

16、0.54（1.00）×109/L（P=0.037）；96.74（6.78）%vs89.73（7.04）%（P=0.005）；CD8+CD28+細(xì)胞所占絕對值及比例均未見統(tǒng)計學(xué)差異
　　4.8骨髓內(nèi) CD4+CD25+細(xì)胞在動員后絕對值及百分比呈下降趨勢：分別為：0.06（0.14）×109/L vs0.02（0.05）×109/L（P=0.043）、2.62±1.32%vs1.18±0.55%（P=0.010）
　　4.9骨

17、髓內(nèi)CD19+細(xì)胞在動員前后絕對值及百分比差異無統(tǒng)計學(xué)意義：（P值分別為0.333、0.714）
　　5動員后骨髓與外周血淋巴細(xì)胞的比較
　　5.1動員后BM與PB的淋巴細(xì)胞總數(shù)無統(tǒng)計學(xué)差異（P=0.303）
　　5.2動員后BM與PB的CD3+T細(xì)胞有統(tǒng)計學(xué)差異（P=0.037），PB中CD3+T細(xì)胞中位數(shù)為BM內(nèi)1.7倍;動員后BM與PB的CD3+CD4+T細(xì)胞數(shù)量有統(tǒng)計學(xué)差異（P=0.019），PB中CD3+CD

18、4+T細(xì)胞中位數(shù)為BM內(nèi)2.3倍;動員后BM與PB的CD3+CD8+T細(xì)胞數(shù)量無統(tǒng)計學(xué)差異（P=0.198）
　　5.3動員后BM與PB的CD19+B細(xì)胞無統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.198)
　　結(jié)論：
　　1 G-CSF動員后外周血及骨髓中淋巴細(xì)胞絕對值均無明顯升高。
　　2 G-CSF動員后外周血中CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞、CD8+T細(xì)胞、T調(diào)節(jié)細(xì)胞、記憶CD4+T細(xì)胞、初始CD8+T細(xì)胞、記憶CD8+T細(xì)胞