G-CSF動員的供體外周血樹突狀細(xì)胞免疫生物學(xué)特性的研究.pdf

1、為探討G-CSF動員的供體外周血中不同樹突狀細(xì)胞(DC)亞群的生物學(xué)特性，本文從下述兩方面進(jìn)行了研究。 一、G-CSF動員的供體單核細(xì)胞來源的DO免疫生物學(xué)特性研究 實(shí)驗(yàn)方法：G-CSF動員的供體外周血單個(gè)核細(xì)胞細(xì)胞貼壁后，在含IL-4和GM-CSF的無血清培養(yǎng)基中誘導(dǎo)培養(yǎng)7d，再用IL-10、ATG和TNFa進(jìn)一步分組誘導(dǎo)2d。收集上清液及細(xì)胞，分別用流式細(xì)胞術(shù)、ELISA、抗原吞噬實(shí)驗(yàn)和混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)測定

2、各組DC的HLA-DR、CD1a、CD11c、CD40、CD80分子表達(dá)，IL-12(P70)分泌，抗原吞噬功能以及同種異體反應(yīng)刺激功能。 結(jié)論：從G-CSF動員的供體外周血單個(gè)核細(xì)胞中可以誘導(dǎo)產(chǎn)生iDC，TNF-a能誘導(dǎo)其分化成熟，IL-10、ATG誘導(dǎo)可使其獲得致耐受的特性；與健康獻(xiàn)血員相比，G-CSF動員的供體外周血單個(gè)核細(xì)胞來源的DC表型相對幼稚，同種異體反應(yīng)刺激能力較弱；盡管從G-CSF動員的供體PBMC中誘導(dǎo)產(chǎn)生CD

3、la+DC的效率不及未經(jīng)動員的健康獻(xiàn)血員高，但因從動員的供體外周血中可以采集到大量的PBMCs，因此，G-CSF動員的外周血有望成為不同DC的重要來源途徑。 二、G-CSF動員的供體不同DC亞群免疫生物學(xué)特性的研究 實(shí)驗(yàn)方法：用免疫磁珠分離髓細(xì)胞來源的DC(MDC)和漿細(xì)胞來源的DC(PDC)，并分別用TNFa、CpG2006OND誘導(dǎo)為成熟MDC(mMDC)和成熟PDC(mPDC)。具體的研究方法如下：1.流式細(xì)胞術(shù)測

4、定各DC亞群的表型；2.MLR測定不同DC亞群同種異體反應(yīng)刺激能力；3.ELISA測定MLR培養(yǎng)上清液中INF-γ、IL-10的含量，細(xì)胞內(nèi)流式術(shù)測定MLR后CD4+T細(xì)胞的INF-γ和IL-4分泌水平；4.流式細(xì)胞術(shù)和RT-PCR測定MLR后CD4CD25highT細(xì)胞比例和Foxp3mRNA的表達(dá)。 結(jié)論：采集的供體外周血中兩類DC亞群雖然HLA-DR高表達(dá)，但仍處于非成熟狀態(tài)，在合適的條件下分化成熟：無論MDC成熟與否均表

5、現(xiàn)出很強(qiáng)的刺激T細(xì)胞增殖能力，可以促進(jìn)使T細(xì)胞分泌IFN-γ增加，其分泌的增加可能是促進(jìn)向Th1極化的結(jié)果；PDC可能并不像MDC一樣有效地捕獲、處理和負(fù)載抗原到MHC分子上，因此呈遞抗原效率低，表現(xiàn)出對T細(xì)胞的弱刺激增殖特性；PDC雖然也可以促進(jìn)T細(xì)胞分泌IFN-γ的分泌，但似乎并非是通過Th1細(xì)胞分泌；PDC并不能促進(jìn)Th2類因子IL-4的分泌，對Th2的極化作用可能表現(xiàn)在IL-10的分泌上；PDC有誘導(dǎo)CD4+CD25highTr