ADAM8在DEN誘導(dǎo)的小鼠肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的表達(dá)與功能研究.pdf

1、目的：研究去整合素金屬蛋白酶8（ ADAM8）在肝細(xì)胞癌（HCC）的發(fā)生發(fā)展中的具體作用。
　　方法：小鼠被分為5組：每組包含60只小鼠。A組小鼠在24周時(shí)間內(nèi)，僅在每周1、3和5接受腹腔注射300μg/100μl抗ADAM8的單克隆抗體。治療組B1、B2、B3和 B4小鼠自由飲用含30μg·ml-1 DEN的水24周來(lái)誘導(dǎo)肝細(xì)胞癌的發(fā)生。在每周1、3和5，B1、B2、B3和 B4組小鼠分別腹腔注射 PBS,100μg/100μl

2、,200μg/100μl或300μg/100μl的抗ADAM8單克隆抗體。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束的時(shí)候（24周末），小鼠被稱(chēng)重，然后用乙醚進(jìn)行麻醉，通過(guò)心臟穿刺進(jìn)行采血。我們統(tǒng)計(jì)了小鼠的生存率，即24周后存活小鼠的數(shù)量/開(kāi)始實(shí)驗(yàn)時(shí)小鼠的數(shù)量×100。然后小鼠被處死，肝臟被取出。新鮮的肝臟用冰的鹽水洗了兩次，在干凈的紙巾上吸干，稱(chēng)重。相對(duì)肝臟重量，即肝臟重量/最終體重×100，每只小鼠肝臟腫瘤部位的肝臟樣品被分為兩部分，它們分別用來(lái)進(jìn)行組織學(xué)檢測(cè)，蛋

3、白印跡檢測(cè)。對(duì)于組織學(xué)檢測(cè)，肝臟樣品在10％的甲醛溶液中固定24小時(shí)然后進(jìn)行脫水和石蠟包埋。每個(gè)石蠟包埋的組織塊切成6微米的片子，然后用來(lái)進(jìn)行組織學(xué)檢測(cè)。對(duì)于蛋白印跡檢測(cè)，肝臟樣品按照體積比（1:10）的比例加入PBS(0.02M,pH7.4)然后進(jìn)行勻漿，勻漿后的樣品被轉(zhuǎn)移到離心管中，在4℃,10000rpm進(jìn)行離心，中間層的蛋白樣品被收集用作蛋白印跡檢測(cè)。在另外一個(gè)實(shí)驗(yàn)中，60只小鼠僅自由飲用含30μg·ml-1 DEN的水24周來(lái)

4、誘導(dǎo)肝細(xì)胞癌。我們利用蛋白印跡的方法檢測(cè)了誘癌后0、8、16和24周小鼠肝臟ADAM8的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：抗ADAM8單克隆抗體的干預(yù)治療顯著提高了誘癌小鼠的生存率，減少了小鼠體重的損失和相對(duì)肝臟重量的增加，它是以一種劑量依賴(lài)的方式進(jìn)行干預(yù)治療的(P＜0.05或P＜0.01)。用抗ADAM8單克隆抗體進(jìn)行干預(yù)治療后也顯著地降低了小鼠血清中 AST和 ALT的酶活性及AFP的表達(dá)水平(P＜0.05或 P＜0.01)，延緩了小鼠肝

5、癌的發(fā)生與發(fā)展。與用PBS干預(yù)治療的實(shí)驗(yàn)小鼠相比較，用抗 ADAM8單克隆抗體干預(yù)治療后增強(qiáng)了Caspase3、Bax、P53(P＜0.05或 P＜0.01)在小鼠肝臟組織中的表達(dá)，同時(shí)也抑制了 VEGF-A、PCNA、Bcl-2在小鼠肝臟組織中的表達(dá)(P＜0.05或 P＜0.01)，且其表達(dá)情況與抗 ADAM8單克隆抗體呈劑量依賴(lài)的關(guān)系。
　　結(jié)論：研究提示，ADAM8可能是通過(guò)調(diào)節(jié)這些因子的表達(dá)從而促進(jìn)肝細(xì)胞癌的疾病發(fā)展，抗