基于《傷寒論》辛開苦降法對心梗后心室重構(gòu)大鼠的作用及機制研究.pdf

1、理論研究：
　　辛開苦降立法于《黃帝內(nèi)經(jīng)》，成方完備于《傷寒論》，對后世具有深遠的影響?！秱摗分行灵_苦降法具有調(diào)節(jié)開闔樞、協(xié)調(diào)臟腑等功用，廣泛運用于寒熱錯雜痞證、上熱下寒證、痰熱互結(jié)證、瘀熱互結(jié)證等證候之中，對后世脾胃學(xué)說及溫病學(xué)說的形成有一定的影響。
　　心梗后心室重構(gòu)是心梗發(fā)生后心室出現(xiàn)的一系列變化，應(yīng)歸屬于中醫(yī)學(xué)胸痹、心痛、心悸等范疇。中醫(yī)學(xué)對該病的認識，病因主要有外感六淫、情志內(nèi)傷、飲食不節(jié)、年老體衰、久患他病等

2、，病機可歸結(jié)為本虛標(biāo)實，本虛是指心、肺、脾、腎等臟氣血陰陽的虧損，標(biāo)實主要是指痰濁、瘀血、水濕的停聚。
　　課題組通過研究歷代文獻，并結(jié)合臨床觀察，認為隨著人們生活方式、飲食、體質(zhì)等的變化，熱邪在該類疾病中的影響越來越突出。因此提出了瘀熱相互膠結(jié)、相互促進使病情不斷演變發(fā)展的觀點，并總結(jié)出以《傷寒論》辛開苦降法為主治療該類疾病的思路。以辛開苦降法為基礎(chǔ)，結(jié)合現(xiàn)代的藥理研究，擬定了宣痹散結(jié)方，其具有活血化瘀、清熱散結(jié)之功。在多年的臨

3、床運用和臨床研究中已顯示出卓越的療效。
　　心室重構(gòu)的現(xiàn)代機制研究主要有血流動力學(xué)改變、神經(jīng)內(nèi)分泌的激活、炎癥反應(yīng)、細胞凋亡、心肌纖維化等。
　　實驗研究：
　　目的：
　　本課題主要研究基于《傷寒論》辛開苦降法組方的宣痹散結(jié)方對心梗后心室重構(gòu)瘀熱證大鼠的防治作用與機制，并為目前正在作為新藥開發(fā)的該方提供實驗研究支持。
　　方法：
　　1.宣痹散結(jié)方對大鼠疾病和證候的干預(yù)研究。對Wistar大鼠采用結(jié)

4、扎冠狀動脈前降支的方法建立急性心肌梗死模型，存活大鼠喂養(yǎng)4周后即可出現(xiàn)明顯的心室重構(gòu)，對模型B組和宣痹散結(jié)方B組兩組大鼠再以角叉菜膠和活性干酵母制作瘀熱模型。對心室重構(gòu)的研究主要通過心功能、心臟指數(shù)、形態(tài)學(xué)等參數(shù)來觀察。對瘀熱證的觀察主要選用心率、體溫、血常規(guī)、血清中炎癥因子表達水平、血流變等指標(biāo)。
　　2.宣痹散結(jié)方對血清中炎癥因子的干預(yù)研究。運用ELISA法檢測心梗后心室重構(gòu)模型大鼠血清中IL-6、IL-10、TNF-α等炎癥

5、因子的表達水平，以揭示其對大鼠心梗后心室重構(gòu)的作用機制。
　　3.宣痹散結(jié)方對大鼠血清中與纖維化相關(guān)因子的干預(yù)研究。運用ELISA法檢測各組大鼠血清中TGF-β1、MMP-9、TIMP-1、HYP等與纖維化相關(guān)因子的表達水平。
　　4.宣痹散結(jié)方對心梗后心室重構(gòu)蛋白表達的干預(yù)研究。運用Western blotting法測定各組大鼠心肌組織中COL1、 P-smad3、smad7等蛋白的表達。
　　5.宣痹散結(jié)方對心梗后

6、心室重構(gòu)mRNA表達的干預(yù)研究。采用實時熒光定量PCR分析法檢測各組大鼠心肌組織中NF-κB、smad3、smad7、TGF-β1等因子mRNA的表達。
　　結(jié)果：
　　對心室重構(gòu)的影響：①心功能：同模型A組比較，宣痹散結(jié)方A組可明顯提高大鼠心臟射血分數(shù)、但對心室腔無明顯干預(yù)作用；同模型A組比較，卡托普利可減小舒張期和收縮期的心室腔內(nèi)徑，但對心室射血分數(shù)無改善作用。②光鏡和電鏡顯示：模型A組心肌可見明顯壞死灶，心肌細胞腫脹，

7、炎性粒細胞浸潤，心肌線粒體腫脹。卡托普利和宣痹散結(jié)方能夠減輕心肌細胞腫脹，減輕炎性細胞浸潤，改善心肌線粒體病理變化。③通過Masson染色觀察發(fā)現(xiàn)卡托普利和宣痹散結(jié)方能顯著減輕心室重構(gòu)后心肌纖維化程度。
　　對證候的影響：①心率：同模型A組比較，模型B組心率顯著加快，同模型B組比較，宣痹散結(jié)方B組心率顯著降低。②體溫：同模型A組相比，模型B組大鼠在注射活性干酵母后6小時體溫明顯升高，9小時最明顯；同模型B組相比，宣痹散結(jié)方B組大鼠

8、體溫降低顯著。③血常規(guī)：同模型A組比較，模型B組大鼠的血紅蛋白濃度明顯升高，與模型B組相比，宣痹散結(jié)方B組大鼠的紅細胞壓積明顯降低。④血流變：同模型A組相比，模型B組大鼠全血黏度中、高切升高顯著，同模型B組相比，宣痹散結(jié)方B組大鼠的全血黏度低切、中切、紅細胞壓積明顯降低。⑤血清中炎癥因子:同模型A組比較,模型B組大鼠血清中IL-6、TNF-α的表達顯著升高，與模型B組相比，宣痹散結(jié)方B組的IL-10表達明顯升高。
　　作用機制研究

9、：①宣痹散結(jié)方對心梗后心室重構(gòu)大鼠血清中炎癥因子IL-6、TNF-α的病理性表達上調(diào)具有抑制作用，而對IL-10的表達具有促生作用。②對TGF-β1、MMP-9的表達有抑制作用，而對TIMP-1有促生作用。③對COL1、P-smad3蛋白表達有下調(diào)作用，對smad7蛋白表達具有上調(diào)作用。④對NF-κBmRNA、TGF-β1mRNA、smad3mRNA的表達有下調(diào)作用，對smad7mRNA有上調(diào)作用。
　　結(jié)論：
　　1.以《

10、傷寒論》辛開苦降法為基礎(chǔ)的宣痹散結(jié)方對心梗后心室重構(gòu)大鼠的心室重構(gòu)和瘀熱證均能有效地治療和改善。
　　2.宣痹散結(jié)方對NF-kB、IL-6、TNF-α等促使心室重構(gòu)的炎癥因子有下調(diào)和抑制作用，而對炎癥抑制因子IL-10有促生作用，提示其可通過抑制NF-kB所介導(dǎo)的IL-6等炎癥因子所誘發(fā)的免疫炎性反應(yīng),從而對心室重構(gòu)和瘀熱證起到防治作用。
　　3.宣痹散結(jié)方對TGF-β1、MMP-9、COL1、smad3、P-smad3等促

11、使心室重構(gòu)的纖維化因子有下調(diào)和抑制作用，而對抑制纖維化的因子TIMP-1、smad7有促生作用，提示宣痹散結(jié)方可作用于TGFβ1-smad通路，從而發(fā)揮其抗心室重構(gòu)的作用。
　　4.宣痹散結(jié)方，可作用于NF-kB通路以消除心室重構(gòu)過程中的免疫炎性反應(yīng)，并作用于TGFβ1- Smad通路以減輕心肌纖維化，同時對心室重構(gòu)中的瘀熱證候亦具有顯著的改善作用，提示心室重構(gòu)中的NF-kB、TGFβ1- Smad信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的活化與瘀熱證的病機