辛開苦降法對NASH大鼠肝組織PPARα及L-FABPmRNA表達(dá)影響的實驗研究.pdf

1、目的：以溫病學(xué)濕熱證理論為指導(dǎo)，從脾胃立論，以王氏連樸飲為基礎(chǔ)方加味，觀察辛開苦降法對非酒精性脂肪肝肝炎(NASH)大鼠肝組織過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPARα)及肝型脂肪酸結(jié)合蛋白(L-FABP)基因(L-FABPmRNA)表達(dá)的影響，探討辛開苦降法調(diào)節(jié)實驗性NASH大鼠脂質(zhì)代謝相關(guān)因子，減輕脂類在肝臟的積聚，緩解氧化應(yīng)激、脂質(zhì)過氧化，保護(hù)肝細(xì)胞，改善肝功能的作用。從脂質(zhì)代謝調(diào)節(jié)因子PPARα和L-FABP的相互關(guān)系研究NASH

2、的病理機(jī)制;研究辛開苦降法對NASH的干預(yù)作用及其機(jī)理。從細(xì)胞和分子水平為NASH中醫(yī)藥防治理論提供理論依據(jù)。
　　 方法：清潔級SD大鼠40只，雌雄各半，體重190-210克左右，隨機(jī)分為4組，分別為:A組:正常對照組B組:空白模型組C組:辛開苦降方防治組D組:西藥對照組（東寶肝泰防治組）每組10只大鼠，常規(guī)飼養(yǎng)3天后，B、C、D三組予以基礎(chǔ)飼料+高脂飼料（10％豬油、2％膽固醇）進(jìn)行NASH造模，8周后各組在高脂飼料喂養(yǎng)同時

3、，C組辛開苦降方1ml/100g/d灌胃，每日一次，D組予以東寶肝泰混懸液1ml(0.09g)，每日一次，AB組予以生理鹽水1ml/100g/d灌胃，每日一次。各模型組給藥4周后（即實驗12周）以2％戊巴比妥鈉溶液麻醉處死所有動物，迅速按常規(guī)分離血清及留取肝組織。檢測血清指標(biāo):谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、總膽固醇(TCH)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)等。取肝右葉，4℃下制成肝勻漿，按試劑盒操作說明分別測定超

4、氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、游離脂肪酸(FFA)、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(GSH-ST)含量，結(jié)果以每克肝組織的含量表示。肝組織病理觀察:將肝組織用4℃生理鹽水沖洗，在肝臟最大葉距邊緣5mm處取小塊肝組織，中性福爾馬林固定，石蠟包埋，切片，HE染色，光鏡下觀察，評估脂肪變性和炎癥活動程度。另小塊肝組織放-80C冰箱凍存以備作western blot檢測L-FABP。原位雜交技術(shù)檢測肝組織PPARα、L-FABP mRNA的表達(dá)，顯

5、微鏡下觀察顯色結(jié)果及攝影記錄。用醫(yī)學(xué)圖象分析系統(tǒng)行圖象分析，得出積分光密度。
　　 結(jié)果：
　　 1.各組大鼠肝功能和血脂比較:D組（東寶肝泰組）相比B組能夠降低NASH大鼠的TG，TCH水平(p＜0.05);C組（辛開苦降方組）大鼠血清TG，TCH，ALT，AST水平較各模型組顯著降低(P＜0.01)，作用優(yōu)于D組(P＜0.05)2.NASH模型組大鼠肝組織出現(xiàn)中重度脂肪變、不同程度的炎細(xì)胞浸潤及壞死，肝組織MDA含量

6、較正常大鼠顯著增高，肝勻漿SOD的活性明顯降低，模型組較對照組肝組織PPARαmRNA下降(p＜0.05)和L-FABPmRNA表達(dá)顯著增強(qiáng)(p＜0.01)。
　　 3.肝組織PPARαmRNA基因的表達(dá)于MDA含量呈明顯正相關(guān)，與SOD和活性則呈明顯負(fù)相關(guān)。L-FABPmRNA則相反。
　　 4.各組大鼠肝組織炎癥活動程度、肝勻漿MDA含量、肝組織基因PPARαmRNA和蛋白表達(dá)均較模型組大鼠顯著降低，肝勻漿SOD、的

7、活性則較模型組大鼠明顯增高。
　　 結(jié)論：
　　 1.辛開苦降方可以有效降低NASH模型大鼠的肝濕重、肝指數(shù)、血清ALT、AST、TC、TG及肝組織FFA水平，MDA含量（P＜0.01或P＜0.05），能提高NASH大鼠肝組織SOD活性(P＜0.01)，改善病理組織學(xué)變化，具有顯著的抗脂肪氧化、抗炎作用。
　　 2.肝組織PPARα和L-FABP基因表達(dá)水平與NASH的形成和發(fā)展密切相關(guān)，辛開苦降方對模型大鼠肝組

8、織PPARαmRNA表達(dá)明顯增強(qiáng)(P＜0.05)，對L-FABP mRNA和蛋白表達(dá)減弱(P＜0.01)，二者之間呈負(fù)相關(guān)關(guān)系;
　　 3.辛開苦降方能夠激活PPARα和L-FABP mRNA表達(dá)，糾正肝臟脂質(zhì)代謝紊亂，阻止脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，這可能是其防治NASH的重要分子機(jī)制;
　　 4.辛開苦降方增強(qiáng)大鼠PPARα和L-FABP基因的表達(dá)的同時亦不會使脂質(zhì)過氧化作用對肝臟過多的損傷，故而最后能夠保肝降酶、減少血脂、降低